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亞巴猴腫瘤病毒病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

亞巴猴腫瘤病毒病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格
上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
Secretin檢測(cè)試劑盒用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。

更新時(shí)間:2021-03-13
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注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 產(chǎn)品名稱

 亞巴猴腫瘤病毒病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格

 英文名稱

 Yaba Monkey Tumor Virus(YMTV)PCR

 貨號(hào)

 LZP7476

實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
Tween 20L-羥基脯氨酸 99%秋仙堿 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%(HPLC)

Tween 40L-羥脯氨酸甲酯鹽酸鹽 98%秋仙堿 用于植物細(xì)胞培養(yǎng), ≥98% (HPLC)

Tween 60組胺 96%菊苣酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%

Tween 65L-高胱氨酸 98%卡拉膠 試劑級(jí)

Tween 80Fmoc-β-Homogln(Trt)-OH 95%雷公藤紅素  98%

Tween 85Fmoc-β-Homomet-OH 97%白屈菜紅堿 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%

Triton x-100Fmoc-L-beta-高苯氨酸 95%(+)-兒茶素  98%

Triton x-114Fmoc-L-beta-高纈氨酸 97%天然辣椒堿 Nature,≥50% (HPLC)

Triton x-200N-CBZ-羥脯氨酸甲酯 95%硫酸軟骨素(鯊魚) 95%

Triton x-405N(Α)-芐氧羰基-D-組氨酸  98%金雀花堿 分析標(biāo)準(zhǔn)品

Brij-35H-His(Trt)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh金雀花堿 98%

NP-40Fmoc-His(Trt)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB咖啡酸 98%

Antifoam OED60KFmoc-D-His(Trt)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB肉桂 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC)

Antifoam OED24KL-β-高氨酸鹽酸鹽 98%綠原酸 98%

AMEOL-β-高谷氨酸鹽酸鹽 98%蟲草素  98%

GLYMOL-β-高異亮氨酸鹽酸鹽 98%木犀草苷  分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%

1,4-二乙基苯( PDEB )(GCS, ≥99.5% (GC))FLT3 (8F2) Rabbit mAbMLCK  肌球蛋白輕鏈激酶抗體

鄰二氯苯(Standard for GC,>99.9%(GC))Phospho-FLT3 (Tyr969) (C24D9) Rabbit mAbMLC3F/MYL1/3  肌球蛋白輕鏈1/3抗體

十二烷(Standard for GC,≥99.5% (GC))Clusterin (D7N2K) XP® Rabbit mAbMKRN2/RNF62  環(huán)指蛋白62抗體

1,2-二氯烷(Standard for GC,≥99.5%(GC))Clusterin (D7N2K) XP® Rabbit mAbMKRN1/RNF61  環(huán)指蛋白61抗體

鄰苯二甲酸二乙酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))Ajuba (D4D8P) Rabbit mAbMKP-2/DUSP4  絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-2抗體

二異胺(Standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-FLT3 (Tyr589/591) (30D4) Rabbit mAbMKLP1  有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白樣1抗體

間二氯苯(Standard for GC,>99.5%)Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Mkl1/MRTF-A  myocardin相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體

鄰苯二甲酸二正辛酯(standard for GC,≥99.0%(GC))Phospho-FLT3 (Tyr591) (54H1) Mouse mAbMKKS/BBS6  巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體

4,4'-二氨基二苯(Standard for GC,≥99.0%(GC))Perilipin-1 (K117) AntibodyMKK7/ERK7  絲裂原活化蛋白激酶MKK7抗體

鄰苯二甲酸二壬酯(standard for GC,≥99.5%(GC))eIF4G2/p97 (D1A10) Rabbit mAbMKK3/MEK3  絲裂原活化蛋白激酶MKK3抗體
亞巴猴腫瘤病毒病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗體3',5,5',7-Tetrahydroxy-4',6-dimethoxyflavone中文名:別名:5,7,3',5'-Tetrahydroxy-6,4'-dimethoxyflavone分子式:C17H14O8

布氏桿菌菌體蛋白抗體Ophiopogonane E中文名:麥冬二氫高異黃酮E別名:分子式:C19H20O7

紅細(xì)胞2,3 - 二磷酸甘油酸合成酶抗體Kumatakenin中文名:華良姜素別名:熊竹素分子式:C17H14O6

骨成型蛋白受體1A抗體Wighteone中文名:懷特酮?jiǎng)e名:Erythrinin B分子式:C20H18O5

Bcl-xL蛋白抗體7,2'-Dihydroxy-5,8-dimethoxyflavane中文名:別名:分子式:C17H16O6

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