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MTT檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

MTT檢測(cè)試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)ELISA試劑盒人ELISA試劑盒96T/48T人α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試劑盒人ELISA試劑盒96T/48T人α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒 人ELISA試劑盒96T/48T人α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA試劑盒人ELISA試劑盒96T/48T

更新時(shí)間:2022-06-20
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公司產(chǎn)品僅供科研使用,下列是產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱英文名稱規(guī)格貨號(hào)
MTT檢測(cè)試劑盒MTT Assay Kit500次LZ-01X6322

商品介紹:
MTT廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng),其原理是MTT可以被活細(xì)胞線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成深紫色的formazan結(jié)晶,而死細(xì)胞則無此活性。深紫色的formazan結(jié)晶被溶解后可以通過測(cè)定490nm波長(zhǎng)的光吸收而測(cè)定出其濃度,并由此推測(cè)出細(xì)胞的活力,細(xì)胞增殖越旺盛,則吸光度越高;細(xì)胞毒性越大,則吸光度越低。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.采用*的Formazan溶解液,可以充分溶解formazan,減少誤差。
2.背景低,靈敏度高,線性范圍寬,重復(fù)性好。
3.本產(chǎn)品為足夠500次(5個(gè)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板)微孔板檢測(cè)。
4.可用于生物活性因子活性檢測(cè)、抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)、腫瘤放射敏感性測(cè)定等。

存條件:低溫運(yùn)輸、-20℃保存(但溶液B也可以常溫運(yùn)輸和保存),有效期一年。
使用方法:
下面操作是檢測(cè)細(xì)胞毒性的試驗(yàn),其他應(yīng)用跟此類似或更簡(jiǎn)單(如生長(zhǎng)曲線試驗(yàn)),操作步驟可以以此為基礎(chǔ)稍作修改即可,故不再贅述。
㈠、接種細(xì)胞
1.按常規(guī)消化法消化匯合的單層細(xì)胞,收集到含血清的培養(yǎng)基中。
2.200g離心5分鐘收集細(xì)胞沉淀。
3.用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀,制備成單細(xì)胞懸浮液并計(jì)數(shù)。
4.將細(xì)胞稀釋到2.5×103個(gè)/mL~5×10個(gè)/mL之間(需要根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度決定),如果不知道生長(zhǎng)數(shù)度,一般可以稀釋到1×10個(gè)/mL。
5.將足夠量的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中(便于用排槍取樣)。一個(gè)96孔板的MTT檢測(cè)需要約20mL的細(xì)胞懸液。
6.用排槍在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL細(xì)胞懸液(對(duì)正常細(xì)胞)。如果是腫瘤細(xì)胞,則加入100μL腫瘤細(xì)胞懸液和100μL培養(yǎng)基(總體積為200μL)。注意:一定要把細(xì)胞加在孔的正中,否則細(xì)胞會(huì)聚集在孔的角落處,影響試驗(yàn)。
7.用排槍在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟細(xì)胞懸液等體積的培養(yǎng)基。第1 列各孔將作為+培養(yǎng)基-細(xì)胞+MTT對(duì)照(用于測(cè)OD時(shí)調(diào)零),第12列加培養(yǎng)基的作用是減少邊緣效應(yīng)對(duì)第11 列反應(yīng)的影響。
8.按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法在37℃和5% CO2條件下孵育1-3天,使細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期。
㈡、藥物處理
9.用培養(yǎng)基將藥物稀釋到8個(gè)待測(cè)濃度(如果不知道待測(cè)濃度,則需要預(yù)試驗(yàn)確定),一般一種藥物需要做3塊平行板。
10.去除第2到第11列(共10列)各孔中的培養(yǎng)基(不要觸動(dòng)細(xì)胞),保留第1 列和第12列各孔中的培養(yǎng)基。
11.在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鮮培養(yǎng)基,這些孔將作為+培養(yǎng)基+細(xì)胞-藥物的對(duì)照。
12.在第3到第10列(共8列)各孔中加入8個(gè)濃度梯度的待測(cè)藥物,每列加入一個(gè)濃度的藥物。
13.按常規(guī)方法把96孔板繼續(xù)放在在37℃和5% CO2條件下孵育一定的時(shí)間,此段時(shí)間即為藥物處理細(xì)胞的時(shí)間,由用戶自己決定。
14.處理結(jié)束后去除第2 到第11列(共10列,均含細(xì)胞)所有孔中的培養(yǎng)基,并再加入100μL新鮮培養(yǎng)基。
15.每天換培養(yǎng)使細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)增2-3倍(所需時(shí)間隨細(xì)胞不同而不同)。
㈢、存活細(xì)胞計(jì)數(shù)
16.在生長(zhǎng)末期,去除第1到第11列各孔中的培養(yǎng)基后,再加入100μL新鮮培養(yǎng)基和10μL溶液A(含MTT成分),用錫箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)4-8小時(shí)。注意:溶液A在低溫情況下會(huì)凝固,使用前請(qǐng)室溫放置或20-25℃水浴至全部溶解,搖勻后使用。MTT有致癌性,一定要帶手套操作。
17.小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)基(含溶液A)。由于培養(yǎng)基可能會(huì)影響光吸收,最好盡可能去除。
18.每孔加入100μL溶液B,置搖床上低速振蕩10分鐘,使MTT形成的formazan結(jié)晶物充分溶解。
19.由于產(chǎn)物不穩(wěn)定,故需要立即在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上選擇490nm測(cè)定吸光度。
?注意:用第1 列各孔(+培養(yǎng)基-細(xì)胞+MTT對(duì)照)調(diào)零。
20.計(jì)數(shù)同樣處理的各次重復(fù)的平均值。
21.以藥物濃度為橫軸,以吸光度為縱軸繪制曲線。由于各處理吸光度絕對(duì)值差別很大,一般需將其轉(zhuǎn)化成生長(zhǎng)抑制率(以不加藥物的第2和第11列各孔數(shù)據(jù)的平均數(shù)作為100%),這樣便于計(jì)算出IC50,用于各種藥物處理效果的比較。注意:如果測(cè)生長(zhǎng)曲線,則以時(shí)間為橫軸。正常生長(zhǎng)曲線一般呈現(xiàn)S型,具有促進(jìn)作用的則斜率加大。

注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

人CD14分子(CDl4)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人CD30分子(CD30)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人chemerin ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人CXC趨化因子受體1(CXCR1)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人C多肽(CP) ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

XY-E11196    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人C型鈉尿肽(CNP)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員E(CLEC4E)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人D-乳酸脫氫酶(D-LDH) ELISA試劑盒      人ELISA試劑盒    96T/48T    

人Dickkopf 1(DKK1)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人D二聚體(D2D)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人EB病毒IgA(EBv IgA)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人EB病毒IgM(EBv IgM)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

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人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒      人ELISA試劑盒    96T/48T    

人α-內(nèi)肽(α-EP)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

人α/β干擾素受體(IFN-α/βR)ELISA試劑盒      人ELISA試劑盒    96T/48T    Caspase 9 活性檢測(cè)試劑盒    

Caspase抑制劑(Z-VAD-FMK)    

Caspase 3抑制劑(Ac-DEVD-CHO)    

線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒    

羅丹明123    

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Ad-mCherry-GFP-LC3B    

DAPI溶液(5mg/ml)    

DAPI染色液    

Hoechst 33258細(xì)胞藍(lán)色熒光染料    

Hoechst 33258染色液    

Hoechst 33342細(xì)胞藍(lán)色熒光染料    

Hoechst 33342染色液    

活細(xì)胞染色液(Hoechst 33342)(100×)    

細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)    

碘化丙啶    

Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒    

細(xì)胞周期與凋亡檢測(cè)試劑盒    

Alexa Fluor 488/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒    

Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢測(cè)試劑盒    

Annexin V-EGFP/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒    

Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒    

Annexin V-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒    

MTT檢測(cè)試劑盒Annexin V-PE/7-AAD雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒    

Annexin V-APC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒    

Annexin V-APC/7-AAD雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒    

操作程序:

注意:最重要的是及時(shí)固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,以抑制RNA酶對(duì)mRNA的分解作用。此外,過度固定對(duì)原位雜交有明顯的不利影響。

1.玻片的處理:一般采用多聚賴氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2.細(xì)胞在多聚賴氨酸處理的蓋玻片上進(jìn)行培養(yǎng),條件為37℃和5%的CO2,所用培養(yǎng)基為Dulbecco基礎(chǔ)培養(yǎng)基。細(xì)胞長(zhǎng)好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。

3.培養(yǎng)細(xì)胞和冰凍切片均可用下述方法固定:固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌,干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。

4.30%H2O2 1份+純甲醇50份混合,室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。

5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型,混勻),37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時(shí)也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。

6.后固定:消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。

7.預(yù)雜交:濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體,不洗。

8.雜交——按每張切片20μι雜交液,加在切片上。將原位雜交專用蓋玻片的保護(hù)膜揭開后,蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。

9.雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。

10.滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗

11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

12.滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

13.滴加化過氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。

14.DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,混勻,加至標(biāo)本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。

15.必要時(shí)蘇木素復(fù)染,充分水洗。

16.酒精脫水,二甲苯透明,封片。


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