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卵形瘧原蟲PCR檢測試劑盒價格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:N-MID-OT檢測試劑盒入標(biāo)本、標(biāo)準品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌
產(chǎn)品分類
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1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
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產(chǎn)品名稱 | 卵形瘧原蟲PCR檢測試劑盒價格 |
英文名稱 | Plasmodium ovalePCR |
貨號 | LZP7149 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
TES銅片 AR,99.5% metals basis乙烯利 80%
TES sodium salt化鎘 AR,99.5%無四氯化錫 AR
TAPS次氯酸鈣 technical grade三苯基氯化錫 96%
TAPS sodium salt線狀氧化銅 AR乙烯利 80%
TAPSO二苯胺磺酸鈉 IND赤霉素 >90% (HPLC)
TAPSO sodium salt二苯胺磺酸鈉 ≥97.0% (HPLC)蒙脫土KSF 蒙脫土KSF ,10 m²/g
DIPSO sodium salt2,6-二-O-甲基-β-環(huán)糊精 98%N-乙基嗎啉 99%
成套緩沖劑1,2-環(huán)己二胺四乙酸(DCTA) AR,97.0%N-乙基嗎啉 蛋白測序, ≥99.5% (GC)
PBS(Phosphate buffer saline) powdered反式-1.2-環(huán)己二胺四乙酸 98%N-甲酰嗎啉 99%
Buffer solution二安替比林 ARN-甲基嗎啉 CP,98%
Phosphate Buffer solution二安替比林 CPN-甲基嗎啉 GR,99%
Carbonate Buffer solution二安替比林 98%二甲基硅油DC-200 粘度~10 mPa.s, neat(25 °C)
TRIS-HC1 Buffer solution二乙烯三胺五乙酸 CP 二甲基硅油DC-200 粘度~30000 mPa.s, neat(25 °C)
Sodium acetate -Acetic acid Buffer solution2,6-二氯酚靛鈉鹽 AR二甲基硅油DC-200 粘度~60000 mPa.s, neat(25 °C)
Barbitone sodium-Hydrochloric acid Buffer solutionN,N-二甲基對苯二胺 AR,環(huán)保試劑,96%1-萘酚 AR,99.0%
Borax-Hydrochloric acid Buffer solution二苯氨基脲 AR萘 99.6%
磷酸氯喹,氯喹二磷酸鹽HMGN1 (D1I5O) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗小鼠IgG
(-)-莨菪堿,L-天仙子胺,L-天仙子堿NXF1 (D5X4G) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG/Bio 生物素標(biāo)記的兔抗小鼠IgG
(-)-莨菪堿,L-天仙子胺,澳洲毒茄堿(標(biāo)準品)PathScan®Phospho-Ron (panTyr) Sandwich ELISA KitRabbit Anti-mouse IgG/APC APC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG
葡聚糖D70/右旋糖苷Aurora A/B Substrate Antibody Sampler KitRabbit Anti-mouse IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的兔抗小鼠IgG
右旋糖苷/葡聚糖D40Human IL-17A Neutralizing (D13C2) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗小鼠IgG
葡聚糖D20/右旋糖苷LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗小鼠IgG
沙格列汀/沙克列汀鹽酸鹽LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠IgG
表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG95%)Procaspase Antibody Sampler KitRabbit Anti-mouse IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗小鼠IgG
達沙替尼一合物MEIS1/2 AntibodyRabbit anti-mouse IgG whole serum 兔抗小鼠IgG抗血清
依西美坦Phospho-Gab1 (Tyr659) AntibodyRabbit Anti-mouse IgG 兔抗小鼠IgG
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