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鄰單胞菌通用PCR檢測試劑盒說明書上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:GAP檢測試劑盒 其它動物細胞因子;細胞凋亡,活性多肽、自身抗體 ,血栓與止血, 骨代謝,肝纖維化,腫瘤內(nèi)分泌
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
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產(chǎn)品名稱 | 鄰單胞菌通用PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Pleisiomonas spp.PCR |
貨號 | LZP7151 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
Paraffin oil乙二縮雙(鄰氨基酚) 98%酮 色譜級,≥99.8%(GC)
Lileic acid乙二縮雙(鄰氨基酚) CP乙酸丁酯 for HPLC, ≥99.7% (GC)
Oleic acid十七烷 AR,95.0%1,4-二氧六環(huán) HPLC, ≥99.5%
5-FOA靛藍二磺酸鈉 Biological stain乙酸乙酯 for HPLC, 99.9%
Shikimic acid三氯化 AR,97.0%正庚烷 農(nóng)殘級, ≥99%(GC)
Palmitoleic acid堿式碳酸鉛 AR,99.0%正戊烷 for HPLC, ≥99.0%
CyDTA堿式碳酸鉛 ACS吡啶 for HPLC, ≥99.9%
PABA發(fā)煙硝酸 AR四 for HPLC, ≥99.9%
PABA sodium salt間酚 IND甲苯 for HPLC, 99.9%()
4-Amibenzenesulfonic acid鹽酸萘乙二胺 AR,98%L-a-氨基己二酸 98%
Maleic acid黑色素(溶) Biological stain聚氯乙烯 K-value 72-71
Maleic acid sodium salt鹽酸萘乙二胺 ACS, >98%聚氯乙烯 K-value 68-65
Sulfamic acid亞硝酸 CP,95%聚氯乙烯 K-value 62-60
EDTA四草酸,二 PT聚氯乙烯 K-value 59-55
EDTA-FeNa偏磷酸 AR乙酰胺 AR,99%
EDTA-MgNa2鍺試劑 AR酰胺 96%
法羅培南(鈉)(2.5)SignalSilence® AUF1/hnRNP D siRNA IRabbit Anti-Monkey IgM 兔抗猴IgM
法羅培南鈉(標準品)PiT1/SLC20A1 (D1Z4X) Rabbit mAbRabbit Anti-Monkey IgG/RBITC 羅丹明標記的兔抗猴IgG
芐基肼RBBP5 (D4Y7R) Rabbit mAbRabbit Anti-Monkey IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的兔抗猴IgG
芐基肼(標準品)DMF (Dimethylformamide)Rabbit Anti-Monkey IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗猴IgG
/PMSFCleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9) Rabbit mAb (PE Conjugate)Rabbit Anti-Monkey IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗猴IgG
奧利司他SimpleChIP® Human tRNA-Leu Anti-Codon (TAG) PrimersRabbit Anti-Monkey IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗猴IgG
利福霉素鈉;利福霉素SV鈉S-Tag (D2K2V) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-Monkey IgG/PE PE標記的兔抗猴IgG
醋酸奧曲肽Malachite Green Phosphate Detection KitRabbit Anti-Monkey IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記的兔抗猴IgG
S(+)-2-氨基-1-丁FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)Rabbit Anti-Monkey IgG/Gold 膠體金標記的兔抗猴IgG
D-鞘氨NCK1 (5B7) Mouse mAbRabbit Anti-Monkey IgG/FITC FITC標記的兔抗猴IgG
鄰單胞菌通用PCR檢測試劑盒說明書人全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
人固(ALD)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
人縮酶(ALD)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:5克
人缺血修飾白蛋白(IMA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1克
人熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
人熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT5克
人熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1克
人熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。