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純綠青霉PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

純綠青霉PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格
上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
Resistin檢測(cè)試劑盒顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)

更新時(shí)間:2021-03-13
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注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 產(chǎn)品名稱

 純綠青霉PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格

 英文名稱

 Penicillium viridicatumPCR

 貨號(hào)

 LZP7132

實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
1,10-Phenanthroline hydrate2-甲基丁酸 98%(R)-1-Boc-3-羥基吡咯烷  98%

o-Phenanthroline hydrochloride2-甲基丁酸 天然, ≥98%, Kosher2-(1-哌啶基)苯 97%

2-Nitrophel對(duì)甲氧基苯甲 98%喹唑啉 98%

4-Nitrophel對(duì)甲氧基苯甲 ≥98%, FCC, FG三氟磺酸鈧 98%

2-Nitroaniline乙酸薄荷酯  98%四氫-2 2-二甲基-4H-吡喃-4-酮 95%

4-Nitroaniline十四酸 Standard for GC,≥99.5% (GC)三(4-溴苯基)胺 98%

3-Nitroaniline十四酸 98%2-甲酰基噻唑 97%

Alumin十四酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% (GC500ml透氣不透液墊片 40mm口徑 配套42mm口徑蓋

Rhodamine 6G十四酸 ≥98%,FCC, FG1,3-二甲基酸 99%

Rosolic acid十四酸 ≥99%(GC)3-苯基吡啶 97%

Rhodizonic acid sodium salt苯甲酸甲酯 AR,98%2-苯基吡啶 98%

5-Nitro-1,10-phenanthroline苯甲酸甲酯 99%碳酸鋇 AR,99%

Pyrocatechol violet月桂酸甲酯 99%碳酸鍶 AR,99%

Carbon Activated月桂酸甲酯 Standard for GC,≥99.5% (GC)2-環(huán)戊酮 97%

Acid red 66十二酸甲酯  分析標(biāo)準(zhǔn)品碳酸鋇 AR,99%

m-Cresol purple甲基環(huán)戊烯酮 98%碳酸鋇 CP,98%

馬來酸氟伏沙明VDAC (D73D12) Rabbit mAb (HRP Conjugate)RAMP1  受體活性修飾蛋白1抗體

馬來酸氟伏沙明(標(biāo)準(zhǔn)品)MacroH2A1.1 (D5F6N) Rabbit mAbRAMP/CDT2  維甲酸調(diào)節(jié)核基質(zhì)相關(guān)蛋白

福美斯坦GSK-3β (D5C5Z) XP® Rabbit mAbRALDH2  視黃脫氫酶2型抗體

福美斯坦(標(biāo)準(zhǔn)品)GSK-3β (D5C5Z) XP® Rabbit mAbRALB  Ras樣蛋白B抗體

福辛普利鈉BRE (D8Q1J) Rabbit mAbRALA+RALB  Ras樣蛋白A+B抗體

呋塞米(速尿)SMARCAD1 AntibodyRALA  Ras樣蛋白A抗體

呋塞米(標(biāo)準(zhǔn)品)p44/42 MAPK (Erk1/2) Blocking Peptide (#4696 Specific)RAIDD  CASP2凋亡相關(guān)蛋白抗體

加蘭他敏Eps15 (D3K8R) Rabbit mAbRAG2  重組激活基因2蛋白抗體

吉非羅齊HIRA (D6O8L) Rabbit mAbRAG1/RNF74  環(huán)指蛋白74抗體(重組激活基因1)

吉非羅齊(標(biāo)準(zhǔn)品)PazopanibRAE1  mRNA結(jié)合蛋白抗體
純綠青霉PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格人磷酯酰肌醇特異性磷酯酶C(PIPLC)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:50毫升

人鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原2(SCCAg-2)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT25克

人鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原(SCCAg)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT25克

人流感病毒A(FLUA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

人流感病毒抗體IgG(FLU)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100條

人流行性腮腺炎(EP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100條

人流行性乙型腦炎抗體IgG(JEIgG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:800條/箱

人氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1000本/箱

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TEL:021-61210612

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