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TEC細(xì)胞公司相關(guān)產(chǎn)品:二氫辣椒素酯G-418 遺傳霉素 Merck BAD蛋白表達(dá)流式儀檢測試劑盒二氫兩面針堿Gentamycin Sulfate 硫酸慶大霉素 Amresco BAD蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒
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產(chǎn)品名稱:胸腺上皮細(xì)胞
英文簡稱:TEC細(xì)胞
貨號:LZ-X969823
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè);
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
仙鶴草內(nèi)酯-6-O-葡萄糖甙甲基藍(lán)酵母氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法定量檢測試劑盒(羥自由基)
腺華素Amygdalin 扁桃苷酵母樣品二維電泳裂解液
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小蕓木香豆精MTT 噻唑藍(lán) Amresco酵母乙酰輔酶A膽固乙酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)活性比色法定量檢測試劑盒
瀉根酸MTT 噻唑藍(lán) Amresco酵母乙酰輔酶A膽固乙酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)活性熒光定量檢測試劑盒
辛可寧TTC 2,3,5氯化三苯基四氮唑 Amresco酵母乙酰輔酶A羧化酶(ACETYL-COA CARBOXYLASE)活性比色法定量檢測試劑盒
辛夷烯酮TTC 2,3,5氯化三苯基四氮唑 Amresco酵母脂肪酸合成酶(fatty acid synthase)活性比色法定量檢測試劑盒
新比克白芷內(nèi)酯TTC 2,3,5氯化三苯基四氮唑 Amresco酵母總ATP酶(total ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒
新槐S-adenosyl-L-methionine(SAM) S-腺苷-L-蛋氨酸結(jié)晶紫群落染色試劑盒
星魚甾PMS 吩硫酸甲脂頡氨霉素溶液(Valinomycin)
繡線菊堿 FTAPS 三羥基磺酸金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)鑒定16S rDNA PCR擴(kuò)增檢測試劑盒
繡線菊堿APotassium gluconate 葡萄糖酸金黃色葡萄球菌腸素A(Staphylococcus aureus : enterotoxin A)鑒定16S rDNA PCR擴(kuò)增檢測試劑盒
繡線菊內(nèi)醋 BD-Gluconic acid calcium D-葡萄糖酸鈣金黃色葡萄球菌腸素B(Staphylococcus aureus : enterotoxin B)鑒定16S rDNA PCR擴(kuò)增檢測試劑盒
TEC細(xì)胞神經(jīng)肽Y受體Y2(NPYR2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human TTL ELISA Kit糖皮質(zhì)激素受體抗體
周期素依賴性激酶4(CDK4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human TUSC5 ELISA Kit胰高血糖素樣肽-1抗體
非神經(jīng)元性烯化酶(NNE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human TTLL10 ELISA Kit葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗體
軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human TWF1 ELISA Kit凝溶膠蛋白抗體
Bcl2同源拮抗劑1(BAK1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human TTRAP ELISA Kit生長激素釋放激素抗體
胎盤生長因子(PGF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human TWIST1(Twist-related protein 1) ELISA Kit膠質(zhì)纖維酸性蛋白抗體
硒蛋白P(SEPP1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human TUB ELISA Kit綠色熒光蛋白(免疫組化用抗體)
注意事項(xiàng):
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細(xì)菌或真菌污染,會(huì)嚴(yán)重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀察時(shí),盡量縮短觀察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細(xì)胞儀檢測時(shí),如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。