產(chǎn)品名稱：類鱗狀上皮舌癌細(xì)胞；SCCS-4
英文簡稱：SCCS-4細(xì)胞

貨號：LZ-X968543
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4-乙苯乙炔污黑腐皮殼拉丁屬名: Pleurotus floridanus

4-乙苯乙炔華麗側(cè)耳 (佛羅里達側(cè)耳)拉丁屬名: sp.

4--3-氟苯鏈球菌(不定種)用途: 食用菌

4--3-氟苯側(cè)耳拉丁屬名: Lactobacillus bobalius

4--3-氟苯巴博乳桿菌拉丁屬名: Exophiala jeanselmei

2-氟-4- ATCC 10224拉丁屬名: coli

2-氟-4-大腸埃希菌拉丁屬名: Curvularia cymbopogonis

2-氟-4-香茅彎孢拉丁屬名: Bacillus  thuringiensis

2-溴-4'-氟苯乙蘇云金芽胞桿菌蠟螟亞種拉丁屬名: Arthrobacter ramosus

2-溴-4'-氟苯乙分枝節(jié)桿菌拉丁屬名: Salmonella  typhimurium

4-氟-α-芐鼠傷寒沙門氏菌 TA97a拉丁屬名: Flavobacterium panaciterrae

對氟苯酰黃桿菌拉丁屬名: Georgenia muralis

對氟苯酰墻壁圣格奧爾根菌拉丁屬名: Bacillus subtilis

對氟苯酰枯草芽孢桿菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

3-氟苯鐘器腐霉拉丁屬名: Mycobacterium abscessus

3-氟苯膿腫分枝桿菌拉丁屬名: Penicillium spinulosum
SCCS-4細(xì)胞兔小核糖核蛋白多肽C(SNRPC)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2,4-二氟苯冠突散囊菌拉丁屬名: Escherichia coli

兔成纖維生長因子6(FGF6)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 三氟磺鈧大腸埃希氏菌拉丁屬名: Aspergillus ruber

兔二氫嘧啶酶樣蛋白3(DPYSL3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 三氟磺鈧赤曲霉拉丁屬名: Sunxiuqinia elliptica

兔脂肪分化相關(guān)蛋白(ADRP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 三氟磺鈧橢圓孫秀芹氏菌拉丁屬名: Bisifusarium dimerum

兔血小板親和蛋白2(PKP2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒三氟磺鈧雙胞雙鐮孢拉丁屬名: Acremonium persicinum

兔α乳清蛋白(α-La)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒S-3-(二氨）吡咯烷雙鹽鹽桃色枝頂孢拉丁屬名: Lophodermium pinastri

兔谷氨脫氫酶(GDH/GLDH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  五水釕(III)松針散斑殼拉丁屬名: Chaetomium homopilatum

兔酪氨酶(TYR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒乙酰鎵 (metals basis)同絲毛殼拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

兔補體1抑制因子(C1INH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  乙酰鎵 (metals basis)釀酒酵母拉丁屬名: Penicillium guizhouanum

兔質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒非布索坦貴州青霉拉丁屬名: Kocuria  sp.

兔腫瘤相關(guān)抗原(TAA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Xenin 25 acetate salt考克氏菌屬拉丁屬名: Penicillium vinaceum

兔β2微球蛋白(BMG/β2-MG)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒α,α-二苯-N--D-脯氨酒色青霉注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

兔血小板因子4(PF4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒α,α-二苯-N--D-脯氨加納鏈霉菌拉丁屬名: Bacillus cereus

兔α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(α-GST)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒N-(9-芴氧羰)-L-天冬氨 alpha-烯酯蠟樣芽孢桿菌拉丁屬名: Chaetomium globosum

兔色素P450家族成員1A2(CYP1A2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 N-[(9H-芴-9-氧)羰]-L-谷氨1-烯酯球毛殼拉丁屬名: Bacillus indicus

兔低分子量角蛋白(CK-LMW)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1-Boc-4-(氨)哌啶印度芽孢桿菌拉丁屬名: Pantoea  sp.