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A498細(xì)胞公司相關(guān)產(chǎn)品:3-磷酸甘油脫氫酶(兔來源免疫組化用抗體)Phospho-PDGF Receptor alpha(Tyr849)/PDGF Receptor beta (Tyr857)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化血小板源性生長因子受體α/β抗體IgG膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體PDGF-R-B/FITC 熒光素標(biāo)記血小板源性生長因子受體-B抗體IgG
產(chǎn)品分類
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英文簡稱:A498細(xì)胞
貨號:LZ-X968539
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁生長
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價(jià),產(chǎn)品貨期短,價(jià)格優(yōu),售后齊全。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè);
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細(xì)菌或真菌污染,會(huì)嚴(yán)重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀察時(shí),盡量縮短觀察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細(xì)胞儀檢測時(shí),如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2-酰苯加納鏈霉菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
2-酰苯尖孢鐮刀菌拉丁屬名: Newcastle disease virus
4-溴-3-氟三氟苯新城疫病注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
4-溴-3-氟三氟苯殼蕉孢菌用途: 代謝產(chǎn)物具有抗真菌活性。
4-溴-3-氟三氟苯煙色鏈霉菌用途: 固氮
N-叔丁氧羰-N--L-苯氨二環(huán)己鹽根瘤菌拉丁屬名: Corynebacterium glutamicum
N-叔丁氧羰-N--L-苯氨二環(huán)己鹽谷氨棒桿菌拉丁屬名: Flavobacterium aquidurense
1-丁-4-吡啶六氟磷鹽硬水黃桿菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
1-丁-4-吡啶六氟磷鹽鐮刀菌屬注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
3-氟三氟苯沙雷氏菌拉丁屬名: Pseudonocardia carboxydivorans
3-氟三氟苯嗜一氧化碳假諾卡氏菌拉丁屬名: Lentinula edodes
2-氟吡啶-4-香菇拉丁屬名: Amylomyces rouxii
Andarine魯氏淀粉霉拉丁屬名: Pichia fabianii
L-3-(Fmoc-氨)-N-三苯脂肪 6-酰費(fèi)比恩畢赤酵母注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
3,5-雙(三氟)苯1ml吸頭拉丁屬名: Agrococcus baldri
3,5-雙(三氟)苯光神農(nóng)球菌拉丁屬名: Cladosporium cladosporioides
A498細(xì)胞兔腫瘤壞死因子β(TNF-β)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒十六綠色木霉拉丁屬名: Penicillium expansum
兔GATA結(jié)合蛋白1(GATA1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒十六擴(kuò)展青霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
兔磷肌-3-激酶催化亞σ肽(PIK3Cσ)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒L-(+)-環(huán)己甘氨姬菇注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
兔調(diào)節(jié)正常T表達(dá)和分泌因子(RANTES)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 L-(+)-環(huán)己甘氨注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
兔Bcl2同源拮抗劑1(BAK1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒D-α-環(huán)己甘氨衛(wèi)矛拉丁屬名: Bacillus subtilis
兔肝臟糖原磷化酶(PYGL)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒D-α-環(huán)己甘氨枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Sphingopyxis flavimaris
兔唾液乙酰酯酶(SIAE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1-乙-3-咪唑醋鹽黃海鞘氨盒菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
兔脂質(zhì)運(yùn)載蛋白1(LCN1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1-乙-3-咪唑醋鹽香菇拉丁屬名: Hyphopichia burtonii
兔促卵泡素(FSH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 磷-d3伯頓絲孢畢赤酵母用途: 高效表達(dá)、分泌、生產(chǎn)葡聚糖酶
兔外質(zhì)磷糖蛋白(MEPE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 磷-d3巴斯德畢赤酵母用途: 在YMA培養(yǎng)上生長速度快,并明顯產(chǎn),在我國某些栽培大豆品種上有較高的固氮效能
兔神經(jīng)生長因子(NGF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3-氨費(fèi)氏中華根瘤菌拉丁屬名: Monilinia fructicola
兔α干擾素 (IFN-α)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3-氨美澳型核果褐腐病菌拉丁屬名: Sphingomonas sp.
兔游離狀腺素(fT4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Naratriptan hydrochloride鞘氨單胞菌用途: 植物病原物;用于該菌種群遺傳學(xué)研究
兔甘露糖苷酶α1A類成員1(MAN1A1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Succinic-D4 Anhydride銀杏盤多毛孢菌拉丁屬名: 宿主:DH5α,BL21
兔核糖核酶H(RNASEH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2--3-噻吩pESC-Ura注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
兔骨性磷酶(BALP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2--3-噻吩嗜熱脂肪芽胞桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis