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乳酸桿菌(LB)核酸試劑盒廠家上海聯(lián)祖生物相關產品:連翹苷(標準品)TIM-3 (D5D5R™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)L-焦谷氨酸甲酯連翹酯苷A(標準品)RagC (D31G9) XP® Rabbit mAb吖啶橙
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產品名稱 | 乳酸桿菌(LB)核酸試劑盒廠家 |
規(guī)格 | 48T |
貨號 | LZP8090 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
雷酚內酯(標準品)Cas9 (<i>S. pyogenes</i>) (D8Y4K) Rabbit mAb (PE Conjuga)氨基咪唑
雷公藤紅素(標準品)BRSK2 (D29B6) Rabbit mAb2--甲
雷公藤甲素(標準品)Synaptophysin (D35E4) Rabbit mAb2-C-甲基-D-核糖酸-1,內酯
雷公藤內酯酮(標準品)Synaptophysin (D35E4) Rabbit mAb2-基酸
類葉升麻苷,毛蕊花糖苷(標準品)Bafilomycin A12-基酸
利卡靈-B(標準品)Phospho-c-Jun (Ser63) (54B3) Rabbit mAb (Biotinylad)2-溴-4,6-二甲基吡啶
利血平(標準品)Androgen Receptor Antibody (Carboxy-rminal Antigen)1H-1,2,三氮唑-羧酸
櫟櫻酸(標準品)Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) (HRP Conjuga)羥基-2-酸
連翹苷(標準品)TIM-3 (D5D5R™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)L-焦谷氨酸甲酯
連翹酯苷A(標準品)RagC (D31G9) XP® Rabbit mAb吖啶橙
連翹酯苷B(標準品)RagC (D31G9) XP® Rabbit mAb酰酸酯
蓮心(標準品)Synaptophysin (D40C4) Rabbit mAb(三氟甲氧基)基
三尖杉(標準品)BSP II Antibody非諾貝特
遼東楤木皂苷Ⅹ(標準品)TTK (D15B7) Rabbit mAb基磺酰
硫酸氨基葡萄糖(標準品)Anti-mouse IgG (H+L) (DyLight™ 680 Conjuga)6-煙酸酯
硫酸黃連(標準品)Anti-mouse IgG (H+L) (DyLight™ 680 Conjuga)2-煙酰
硫酸軟骨素(標準品)Livin (D61D1) XP® Rabbit mAb茚滿
龍膽苦苷(標準品)Livin (D61D1) XP® Rabbit mAb并呋喃-2-羧酸
酸化蛋白激酶AKT1CD151/MER2/PETA-3/FITC 熒光素標記CD151IgG100 ul
ASH1L蛋白CD155/PVR/FITC 熒光素標記CD155IgG20 ul
α2C-AR腎上腺素能受體CD160/By55/FITC 熒光素標記NK細胞受體BY55IgG100 ul
中心體蛋白AZI1CD161/NK1.1/FITC 熒光素標記兔抗、大、CD161IgG100 ul
α蛋白激酶3(心肌)CD163/M130/FITC 熒光素標記CD163IgG20 ul
表皮型脂氧合酶3(魚鱗病相關蛋白)CD166/ALCAM/FITC 熒光素標記活化白細胞粘附分子IgG100 ul
錨蛋白重復域28CD167a/DDR1/FITC 熒光素標記CD167aIgG20 ul
淋巴細胞相關AF4樣蛋白CD169/Siglec-1/sialoadhesin /FITC 熒光素標記CD169IgG100 ul
錨蛋白重復結構域蛋白12CD170/Siglec-5/FITC 熒光素標記唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素5IgG20 ul
乳酸桿菌(LB)核酸試劑盒廠家小鼠單核巨噬細胞,J774A.1細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠肺上皮細胞,TC-1細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠肝癌細胞,H22細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠間質細胞,TM3細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠骨髓基質細胞,OP9細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠骨髓瘤細胞,Sp2/0-Ag14細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。