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丹毒桿菌(SER)核酸試劑盒廠家

產(chǎn)品簡介

偶聯(lián)受體56抗體Tenacigeside A中文名:別名:17-Epitenacissoside F; 3-O-Pachybiosyl-17-epitenacigenin B分子式:C35H56O12

腸和大腦特定同源蛋白2抗體Daturataturin A aglycone中文名:別名:Desglucodaturataturin A; 7,27-Dihydroxy-1-oxowitha-2,5

更新時間:2021-03-13
訪問次數(shù):664
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注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 產(chǎn)品名稱

 丹毒桿菌(SER)核酸試劑盒廠家

 規(guī)格

 48T

 貨號

 LZP7970

實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
N-酰甘氨酸NEDD4L Antibody3,二氫-2(1H)-喹啉酮

N-酰-L-氨酸Phospho-p130 Cas (Tyr249) Antibody1-(吡啶基)-(二甲氨基)-2--1-酮

N-酰-D-氨酸CREB (48H2) Rabbit mAb (PE Conjuga)吡啶甲酰肼

N'-對甲磺?;?L-精氨酸Phospho-p130 Cas (Tyr165) Antibody阿糖腺苷

N-酰-L-谷氨酰TCL1 (1-21) Mouse mAb9-溴-1-壬

N-酰-L-酪氨酸α-Amylase Antibody5-甲酸酯四氮唑

甲基橙(生物染色)PJA2 Antibody5-甲基四氮唑

二甲酚橙四鈉鹽MCM7 Antibody酸甲酯

半二甲酚橙Tau (Tau46) Mouse mAb硅酸鋁鈉

吖啶Tau (Tau46) Mouse mAb酚

二安替比林Phospho-Na均三酸

分散橙13PD-L1 (Extracellular Domain Specific) (D8T4X) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)2-氨基-5-噻唑鹽酸鹽

酸性橙74Talin-1 (C45F1) Rabbit mAb對

二甲酚橙Talin-1 (C45F1) Rabbit mAb呋喃酸

煌橙,藏花橙GMMP-2 Antibody甲基-2-吡啶

靛紅(吲哚醌)Fyn Antibody芐基肼

新銅試劑(雙環(huán)己酮草酰二腙)Fyn Antibody氨基甲

奈比洛爾鹽酸鹽;奈必洛爾Desmin Antibody1,環(huán)己二

Toll樣受體7(TLR-7)ELISA試劑盒TNFSF4  腫瘤壞死因子配體超家族成員420 ul

Toll樣受體4(TLR4)ELISA試劑盒OX40/CD134/TNFRSF4  CD134100 ul

toll樣受體3(TLR3)ELISA試劑盒TNF-beta  腫瘤壞死因子-β20 ul

toll樣受體1(TLR1)ELISA試劑盒TNFAIP1  腫瘤壞死因子α誘導蛋白1100 ul

TGF-β誘導早期基因1(TIEG1)ELISA試劑盒TNFSF14  腫瘤壞死因子配體超家族成員14100 ul

Tau蛋白ELISA試劑盒TNFAIP3  腫瘤壞死因子α誘導蛋白320 ul

TAR DNA結(jié)合蛋白43(TARDBP)ELISA試劑盒Acetylad-p53 (Lys382)  ?;疨53(Lys382)100 ul

Syndecan-1/CD138(SDC1)ELISA試劑盒TNFSF18  腫瘤壞死因子配體超家族成員18100 ul

Smad7 ELISA試劑盒HVEM/TNFRSF14  腫瘤壞死因子受體超家族成員14100 ul
丹毒桿菌(SER)核酸試劑盒廠家鳥嘌呤核苷酸交換因子GEFT抗體21-Deoxyneridiene B中文名:別名:20R-Hydroxypregna-4,6-diene-3,12-dione分子式:C21H28O3

膠漿成熟因子β抗體Dehydroadynerigenin glucosyldigitaloside中文名:別名:分子式:C36H52O13

蛋白偶聯(lián)受體56抗體Tenacigeside A中文名:別名:17-Epitenacissoside F; 3-O-Pachybiosyl-17-epitenacigenin B分子式:C35H56O12

腸和大腦特定同源蛋白2抗體Daturataturin A aglycone中文名:別名:Desglucodaturataturin A; 7,27-Dihydroxy-1-oxowitha-2,5,24-trielide分子式:C28H38O5

甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白1抗體6-Hydroxystigmasta-4,22-dien-3-one中文名:別名:分子式:C29H46O2

 

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