組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
Fmoc-L-纈氨酸MAVS Antibody2-甲基-硝基吡啶-N-氧化物

Fmoc-N-*基-L-天冬酰MSH6 (P150) Antibody5-甲基-3(2H)-噠酮

N'-芴甲氧羰基-N-芐氧羰基-L-賴氨酸MSH6 (P150) Antibody8-氧-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷

Fmoc-L-賴氨酸鹽酸鹽IDH1 Antibody三氟磺酸鐿水合物

N-芴甲氧羰基-L-氨酸五氟酯FTH1 Antibody2-甲氧基溴芐,95%

N-α-Fmoc-N-γ-*游基-L-谷氨酸五氟酯Streptavidin-HRP酸三異酯

氧化白藜蘆(標(biāo)準(zhǔn)品)Troponin I Antibody2,6-二甲氧基萘

氧化白藜蘆MCM3 (D47B6) Rabbit mAb1-芐基-羥基氮雜環(huán)丁烷

?；邹继J(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Troponin I (Cardiac) (Ser23/24) Antibody4,5,6,7-四氫噻吩并[3.2-c]吡啶

酰化白藜蘆PN (D4.3) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)-7-氮雜吲哚

N,N'-雙(芴甲氧羰基)-L-賴氨酸五氟基酯Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)穿心蓮內(nèi)酯

Fmoc-N'-甲基*基-L-賴氨酸Phospho-Na6-氨基青霉烷酸

芴甲氧羰基-O-芐基-L-蘇氨酸MCM2 Antibody三(2-呋喃)化氫

N'-Fmoc-L-賴氨酸Calnexin (C5C9) Rabbit mAb (HRP Conjuga)2-氨基-5-甲基吡

Fmoc-天門冬氨酸-β-芐酯Galectin-1/LGALS1 (8A12) Mouse mAb鄰甲基

Fmoc-(吡啶基)-L-氨酸Phospho-p130 Cas (Tyr410) Antibody-氟甲

芴甲氧羰基-L-天冬氨酸-1-叔丁酯MCM3 Antibody1-Boc-吡唑-酸頻哪酯

N-[(9H-芴-9-甲氧基)羰基]-N'-[(2-氧基)羰基]-L-賴氨酸DPP4/CD26 (D6D8K) Rabbit mAb (IHC Formulad)溴-2-

α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試劑盒TLR9/CD289   Toll樣受體9100 ul

α2-HS糖蛋白(AHSG)ELISA試劑盒TLR11  Toll樣受體1120 ul

α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒Thrombomodulin  血栓調(diào)節(jié)蛋白500 ul

α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒GDNF Receptor alpha 2  膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體alpha 2100 ul

α1抗胰蛋白酶前體(pre-α1-AT)ELISA試劑盒nascin C (C rminal)  細(xì)胞粘合素(C端)腱糖蛋白-C(固生蛋白)20 ul

VGF神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)蛋白(VGF)ELISA試劑盒nascin C/Tn-C  細(xì)胞粘合素(固生蛋白)100 ul

U型肌酸激酶,線粒體(CKMT1A)ELISA試劑盒TNF-alpha  腫瘤壞死因子-α100 ul

T細(xì)胞活化核因子5(NFAT5)ELISA試劑盒TNF-alpha  腫瘤壞死因子-α100 ul

Toll樣受體9(TLR9)ELISA試劑盒TNF-alpha  腫瘤壞死因子-α100 ul
豬細(xì)小病毒(PPV)核酸試劑盒價(jià)格干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體Pungiolide A中文名：別名：分子式：C30H36O7

磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體Nardoeudesmol A中文名：別名：分子式：C15H24O2

核蛋白4抗體（Ran結(jié)合蛋白4）Nardosinediol中文名：別名：分子式：C15H24O3

免疫球蛋白重鏈可變區(qū)抗體Narchil B中文名：別名：分子式：C12H16O3

白細(xì)胞介素18結(jié)合蛋白抗體1-O-Acetyl-6-O-isobutyrylbritannilactone中文名：1-O-乙?；?6-O-異丁酰基大花旋覆花內(nèi)酯別名：分子式：C21H30O6