Product Center
合成酶3(內(nèi)皮型)抗體N-(4-Amibenzoyl)-β-alanine中文名:對氨基苯甲酰-β-丙氨酸別名:分子式:C10H12N2O3抗志賀毒素大腸桿菌O139抗體(仔豬腫病志賀毒素大腸桿菌O139)2-(2-Amiethyl)-1-methylpyrrolidine中文名:2-(2-氨乙基)-N-甲基吡咯烷別名:分子式:C7H16N2
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
RELATED ARTICLES?
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 玉米MSPCR檢測試劑盒廠家 |
規(guī)格 | 50T |
貨號 | LZP7878 |
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
甲(>99.8%(GC))Met (25H2) Mouse mAb3,3'-二吲哚
正辛烷(>98.5%(GC))ARP2 Antibody10-羥基喜樹
(>99.5%(GC))ARP2 Antibody-鄰甲肼鹽酸鹽
庚烷(>99.0%(GC))Phospho-Met (Tyr1234/1235) (3D7) Rabbit mAb對叔丁基芐
酸酯(>99.5%(GC))Phospho-Met (Tyr1234/1235) (3D7) Rabbit mAb2,二
酸丁酯(>99.0%(GC))c-IAP2 (58C7) Rabbit mAb2-溴
酸異戊酯(>98.0%(GC))c-IAP2 (58C7) Rabbit mAb3,5-二-1-溴
(>99.5%(GC))VASP (9A2) Rabbit mAb2-甲基-甲酸
(>99.5%(GC))VASP (9A2) Rabbit mAb2-甲基-甲酸
1-丁(>99.0%(GC))Phospho-Met (Tyr1349) (130H2) Rabbit mAbN-酰基-D-亮氨酸
溴(含穩(wěn)定劑二)(>99.0%(GC))Phospho-Met (Tyr1349) (130H2) Rabbit mAb2,5-二氟酮
環(huán)己烷(>99.5%(GC))Phospho-Met (Tyr1349) (130H2) Rabbit mAb2-吡啶酸
二甲亞砜(>99.0%(GC))α-Actinin Antibody2-基吡
N,N-二甲酰(>99.5%(GC))Phospho-Met (Tyr1003) (13D11) Rabbit mAb2-氟-6-
甲酸酯(>98.0%(GC))Phospho-Met (Tyr1003) (13D11) Rabbit mAb甲基 吡咯烷-甲酸甲酯 鹽酸鹽
甲酸甲酯(>98.0%(GC))CDK6 (DCS83) Mouse mAbO-6-芐基鳥嘌呤
庚烷(>99.0%(GC)]CDK6 (DCS83) Mouse mAb2-氟酸
己烷(>96.0%(GC)]Phospho-Ack1 (Tyr284) AntibodyN-2-酰鳥嘌呤
雞膽囊收縮素A受體(CCKAR)ELISA試劑盒Phospho-PERK (Thr980) 酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶100 ul
雞單純皰疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ-Ab)ELISA試劑盒PFK2/PFKFB3 6酸果糖激酶2100 ul
雞催素(PRL/LTH)ELISA試劑盒Phospho-PFK2 (Ser466) 酸化6酸果糖激酶2100 ul
雞促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒Fascin1 纖維束1100 ul
雞促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒phospho-FSCN1(Ser39) 酸化纖維束蛋白同源物1100 ul
雞促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒PG-C 胃蛋白酶原C500 ul
雞雌二(E2)ELISA試劑盒PPARGC1A/PGC-1 Alpha 過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α100 ul
雞傳染性支氣管炎(IB)ELISA試劑盒PGRN 顆粒蛋白前體1 Kit
雞傳染性法氏囊病(IBD)ELISA試劑盒Prohibitin 抑制素/腫瘤抑制因子100 ul
玉米MSPCR檢測試劑盒廠家真核啟動因子2α抗體(eIFα2)2-Ami-3-benzyloxypyridine中文名:2-氨基-3-芐氧基吡啶別名:分子式:C12H12N2O
磷酸化一氧化氮合成酶3(內(nèi)皮型)抗體N-(4-Amibenzoyl)-β-alanine中文名:對氨基苯甲酰-β-丙氨酸別名:分子式:C10H12N2O3
抗志賀毒素大腸桿菌O139抗體(仔豬腫病志賀毒素大腸桿菌O139)2-(2-Amiethyl)-1-methylpyrrolidine中文名:2-(2-氨乙基)-N-甲基吡咯烷別名:分子式:C7H16N2
腸出血性大腸桿菌埃希氏菌O157:H7抗體5-Amifluorescein中文名:5-氨基熒光素別名:分子式:C20H135
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶ERK抗體4-Ami-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide中文名:4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺別名:分子式:C14H16N2O4S