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產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱 | 雙歧桿菌PCR檢測試劑盒廠家 |
規(guī)格 | 50T |
貨號 | LZP7814 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
硬脂酸(Standard for GC,>99%(GC))Myc-Tag (9B11) Mouse mAb2-氨基-3,5-二吡
(Standard for GC,>99.5%(GC))Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb羥基
環(huán)丁砜(標準品)Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb溴芐
環(huán)丁砜(Standard for GC,≥99.5%(GC))Myc-Tag (9B11) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)1,二甲基脲嘧啶
十四烷(Standard for GC,>99%(GC))Raptor (24C12) Rabbit mAb溴-2-
3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)(standard for GC,≥99.0%(GC))Raptor (24C12) Rabbit mAb5-溴-1H-吡唑[3,B]吡啶
酸三丁酯(standard for GC,>99.5%)SPAK Antibody羥基-酮
三(Standard for GC,>99.5%)DAP1 Antibody5-溴吲哚-甲
三(Standard for GC,≥99.5%(GC))SCD1 (R347) Antibody(S)-1-(2,6-二-氟基)
1,2,3,四氫萘(THN)(Standard for GC, ≥99.5% (GC))Cathepsin D Antibody吲哚酰
四(Standard for GC,>99.9(GC))Thioredoxin 1 Antibody (Human Specific)2-羥基-2-甲基-1-基-1-酮
三(TFA)(Standard for GC,≥99.5%(GC))LEF1 (C18A7) Rabbit mAb2-硝基咪唑
1,2,三(Standard for GC, ≥99.5% (GC))NUP98 (L205) Antibody噻吩甲酸
四(Standard for GC,≥99.9%(GC))PP5 Antibody3,5-二溴-氨基三氟甲氧基
酸三酯(P)(Standard for GC,>99.7%(GC))PP2A B Subunit (100C1) Rabbit mAb鄰三氟甲
三四(TA)(Standard for GC)PP2A B Subunit (100C1) Rabbit mAb氧異丁酸
1,3,5-*(Standard for GC, ≥99.0% (GC))NUP98 (P671) Antibody2--5-氟煙酸
三正丁(Standard for GC,≥99.5%(GC))IQGAP1 AntibodyN-Boc-(S)-甲酸哌啶
STAT3蛋白抑制分子(PIAS3)ELISA試劑盒Ly-6G/Gr-1 淋巴細胞抗原6G100 ug
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SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白1(SMOC1)ELISA試劑盒Lysozyme 溶菌酶100 ul
SMAD3 ELISA試劑盒Lyn 膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn100 ul
SMAD2 ELISA試劑盒Phospho-Lyn (Tyr507) 膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn100 ul
SHC轉(zhuǎn)化蛋白1(SHC1)ELISA試劑盒Phospho-Lyn (Tyr396) 酸化膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn100 ul
SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)ELISA試劑盒Phospho-Lyn (Tyr497) 酸化膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn100 ul
Seryl- tRNA合成酶,細胞質(zhì)(SARS/SERS)ELISA試劑盒LYVE-1 淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體100 ul
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檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。