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單純皰疹病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:SCCAg檢測(cè)試劑盒產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
產(chǎn)品分類(lèi)
PRODUCT CLASSIFICATION?
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 單純皰疹病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) |
規(guī)格 | 50T |
貨號(hào) | LZP7547 |
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
Oxalic acid dihydrate硫酸新霉素 USP級(jí),680 I.U./mg砜 AR,99%
Tannic acid鹽酸土霉素 95%硫脲 CP,98%
Molybdic acid利福平 97%卵磷脂 from soybean,>90%
Silicic acid硫酸鏈霉素 720 I.U./mg5,10,15,20-四(4-吡啶基)卟啉 97%
Silicotungstic acid hydrate無(wú)檸檬酸 AR, ≥99.5% (T)苯酞 99%
Tungstic acid檸檬酸,一 AR,99.5%2-溴-3-甲基丁酸 98%
2-Butynedioic acid檸檬酸 AR,99.5%氯化磷酰膽堿鈣鹽,四 98%
α-Bromoisobutyric acid氮化鋁 N >33.0%, D50/2.0 μmD-果糖-1,6-二磷酸三鈉鹽,無(wú) 98%
Chrysophanic acid氮化鋁 N >32.5 % ,D97/5.0 μm磷酸吡哆 98%
Cinnamic acid氮化 1 μm, 98.5%磷酸吡哆 98%,用于細(xì)胞培養(yǎng)
Citrazinic acid六方氮化 99.9% metals basis,1~2μm5’-磷酸吡哆,一 98%
Tricyanic acid氮化硅 α-phase,92%,325 mesh吡哆胺 98%
1,1-Cyclobutanedicarboxylic acid氮化硅 β-phase,95%,1-3μm鹽酸吡哆 99%
trans-Ferulic acid碳化鈦 99%,2-4μm對(duì)硝基氯苯 GR,99.5%
Ferulic acid氮化鈦 99.5%,2-10 μm2,4-二硝基氯苯 GR,99%()
Heptadecaic acid碳氮化鈦 powder, 1-2 μm, 99%2-萘胺-1-磺酸 98%
鄰苯二甲(>99.0%(GC))CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAbKBTBD4 BTB-kelch蛋白家族4抗體
2-氨基吡啶(>99.0%(GC)(T))CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAbKBTBD10 BTB-kelch蛋白家族10抗體
2-氨基苯硫酚(>95.0%(T))Rab3A AntibodyKBP KBP蛋白抗體
丹磺酰肼(>95.0%(HPLC)(T))SirT1 (D60E1) Rabbit mAb (Mouse Specific)Kazrin Kazrin蛋白抗體
DBD-H [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-肼基-2,1,3-苯并惡二唑(>98.0%(HPLC))Vimentin (R28) AntibodyKATNA1/Katanin p60 A1 劍蛋白p60亞基A1抗體
NBD-H (=4-肼基-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑肼)(>98.0%(HPLC))Ubiquitin Antibodykatanin p80 劍蛋白p80抗體
1,3-環(huán)己二酮(>98.0%(GC)(T))PHF20 (D96F6) XP® Rabbit mAbKAT4 細(xì)胞周期基因1蛋白抗體
ABD-F[=4-(氨磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(N)(T))Phospho-Tau (Ser202) (D4H7E) Rabbit mAbKAT3B/Ep300 轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體
二茂鐵乙酸(>97.0%(GC))Phospho-Keratin 20 (Ser13) (D9M6O) Rabbit mAbKAT2B/ GCN5/PCAF 組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶PCAF抗體
(肼基羰基)二茂鐵(>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo)記)HMGB1 AntibodyKAT13D/CLOCK 生物鐘KAT13D蛋白抗體
單純皰疹病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)G蛋白偶聯(lián)受體GPR10蛋白抗體2',3'-Di-O-acetyl-5'-deoxy-5-fluorocytidine中文名:別名:分子式:C13H16FN3O6
G蛋白偶聯(lián)受體C5L2蛋白抗體Capecitabine中文名:卡培他濱別名:分子式:C15H22FN3O6
G蛋白偶聯(lián)受體EX33蛋白抗體4-(N-Methyl)-amiantipyrine中文名:別名:分子式:C12H15N3O
G蛋白偶聯(lián)受體GPR102蛋白抗體Valsartan methyl ester中文名:別名:分子式:C25H31N5O3
G蛋白偶聯(lián)受體GPR37樣蛋白1抗體α-D-Glucose中文名:α-D-葡萄糖別名:分子式:C6H12O6