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彭氏變形菌PCR檢測試劑盒說明書上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:SEP1檢測試劑盒在保證產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí),以價(jià)格優(yōu)、到貨快、服務(wù)周到等優(yōu)點(diǎn)獲得了科研人士的*
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
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產(chǎn)品名稱 | 彭氏變形菌PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Proteus penneriPCR |
貨號 | LZP7187 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
HI-EFF-4B環(huán)戊烯 GCS,≥99.5% (GC) 二硫化碳 AR,99.0%
PVA環(huán)戊烯 98%五硫化二磷 99%,P≥27%
Propylene carbonate 99%6-芐氨基嘌呤 99%
Propyl paraben氯, 含穩(wěn)定劑銅, 97%6-芐氨基嘌呤 for plant cell culture,≥99.0%
IPM3-氯-1- 98%4-溴吲哚 98%
Propyl phenylacetate環(huán)己烯 ≥99.0% (GC)3-吲哚丁酸 98%
Tributyl borate環(huán)己烯 CP,98.0% 3-吲哚丁酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%
Tributyl phosphite庚二酸 99%3-吲哚丁酸 Standard for GC
TEP鞣花酸 96%1-萘乙酸 96%
TMP沒食子酸,一物 AR,98.5%氯代異烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.7% (GC)
TPP沒食子酸,一物 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(HPLC)氯代異烷 CP,97%
Triphenyl phosphite沒食子酸甲酯 98%氯代異烷 GR,99%
H295 Estersil焦性沒食子酸 AR,98%氯代十二烷 98%
Methyl palmitoleate焦性沒食子酸 >99.0%(GC)1-氯辛烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品
Propyl acetate沒食子酸酯 98%1,3-二氯烷 98%
Tetraheptylammonium bromide3,4,5-*氧基苯甲酸 99%1,3-二氯烷 standard for GC, ≥99.5% (GC)
青霉素G鹽HIRA (D2A5E) Rabbit mAbRabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗狗IgG
青霉素G(標(biāo)準(zhǔn)品)Cox2 (D5H5) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)Rabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗狗IgG
厄多司坦Phospho-BCL9L (Ser915) AntibodyRabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗狗IgG
鹽酸藥根堿(標(biāo)準(zhǔn)品)DMAP1 AntibodyRabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗狗IgG
D-半乳糖胺鹽酸鹽Phospho-SHP-2 (Tyr580) (D66F10) Rabbit mAb (PE Conjugate)Rabbit anti-Dog IgG whole serum 兔抗狗IgG抗血清
薯蕷皂苷;重樓皂苷III(標(biāo)準(zhǔn)品)APC1 (D1E9D) Rabbit mAbRabbit Anti-dog IgG 兔抗狗IgG
薯蕷皂甙CDK6 (D4S8S) Rabbit mAbRabbit Anti-chicken IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗雞IgM
薯蕷皂素(標(biāo)準(zhǔn)品)CDK6 (D4S8S) Rabbit mAbRabbit Anti-chicken IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗雞IgM
薯蕷皂素CD79A (D1X5C) XP®Rabbit mAbRabbit Anti-chicken IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgM
柚皮素(標(biāo)準(zhǔn)品)PathScan®Phospho-Mer (panTyr) Sandwich ELISA KitRabbit Anti-chicken IgM/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗雞IgM
彭氏變形菌PCR檢測試劑盒說明書人纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1克
人纖調(diào)蛋白(FMOD)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100毫克
人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃1克
人纖維介素蛋白(fgl2)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT5克
人纖維連接素相關(guān)抗原(FRA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:250毫克
人纖維母細(xì)胞表面抗原(FSP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
人?;碳さ鞍?/font>(ASP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT,避光10克
人銜接蛋白酶活化因子1(APAF1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1公斤
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。