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桔青霉PCR檢測試劑盒說明書上海聯(lián)祖生物相關產(chǎn)品:EAR3檢測試劑盒貯存條件: 低溫冷藏,避光,密封,干燥有效期限: 2年
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱 | 桔青霉PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Penicillium citrinumPCR |
貨號 | LZP7123 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
Eosin B肉桂酸 standard for GC,>99.5% (GC) 細胞色素C 95%
Eosin Y sodium salt water soluble肉桂酸 AR,99%DNA酶 ≥300 Kunitz units/mg protein
Eosin Y free acid alcohol soluble肉桂酸 分析標準品DNA酶 ≥2,000 Kunitz units/mg protein
Oil red O肉桂 98%彈性蛋白酶 30 units/mg
Ponceau S肉桂 分析標準品,>99.5%(GC)透明質酸酶 ≥ 300 IU/mg
Methylene Blue trihydratee肉桂酸 ≥99.0%, FG辣根過氧化物酶 RZ:>3.0,活性:>250 IU/mg
TBPB肉桂酸 天然, ≥99%, FCC辣根過氧化物酶 RZ:>2.5,活性:>200 IU/mg
Evans blue香茅 85%,FCC辣根過氧化物酶 RZ:>2.0,活性:>160 IU/mg
INT香茅 96%RZ:1.5 RZ:>1.5,活性:>100 IU/mg
NBT肉桂 98%辣根過氧化物酶 RZ:>3.0,活性:>300 IU/mg
Indigo肉桂 分析標準品,>99%(GC)核糖核酸酶 ≥ 50 Kunitz units/mg
Indigo carmine正癸 Standard for GC,≥99.5% (GC)胰蛋白酶(牛胰臟) potency ≥2500 units/mg
Thymol blue正癸 98%鄰甲酚 99%
Thymol Blue sodium salt琥珀酸二乙酯 98%間甲酚 99.7%,無色
BPB琥珀酸二乙酯 99%間甲酚 Standard for GC,≥99.7%(GC)
Bromophel blue sodium salt琥珀酸二乙酯 standard for GC, ≥99.6% (GC)間甲酚 CP
紅霉酮(特利霉素)Protor-2 (D19A5) Rabbit mAbReprimo 細胞質內(nèi)的糖基化蛋白抗體
替米沙坦RCAS1 (D2B6N) XP® Rabbit mAbRepetin 中間絲相關蛋白抗體
替米沙坦(標準品)RCAS1 (D2B6N) XP® Rabbit mAbRENT1/hUPF1 ATP依賴解旋酶RENT1抗體
rotein A (HRP Conjugate)Renin 腎素/血管緊張素形成酶Ren1抗體
(標準品)TEAD1 (D9X2L) Rabbit mAbRENBP 腎素結合蛋白抗體
噻托溴銨一合物ATP2A1/SERCA1 (D54G12) Rabbit mAbRenalase 腎胺酶抗體
鹽酸胺酮CUEDC2 AntibodyREM/GTP binding protein REM1 GTP結合蛋白REM1抗體
鹽酸胺酮(標準品)FXR1 (D10A2) XP® Rabbit mAbRELN/Reelin 絡絲蛋白抗體
阿莫曲普坦蘋果酸鹽FXR1 (D10A2) XP® Rabbit mAbRELMa/RELM alpha 抵抗素樣分子α抗體
阿糖腺苷PKR (D7F7) Rabbit mAbRELM beta/CCGR 結腸癌相關基因蛋白抗體
桔青霉PCR檢測試劑盒說明書人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1公斤
人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃1克
人可溶性髓系細胞觸發(fā)受體-1(sTREM-1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量: 保存-20℃1毫克
人可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1克
人可溶性細胞因子受體(sCKR)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500毫升
人可溶性腺苷酸環(huán)化酶(sAC)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500毫升
人可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃25毫克
人可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:10毫升
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。