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猿分支桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:FDA檢測(cè)試劑盒熱滅活的目的是使血清中的補(bǔ)體成分滅活,除非必須,不建議做這樣的處理
產(chǎn)品分類
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1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
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產(chǎn)品名稱 | 猿分支桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書 |
英文名稱 | Mycobacterium simiaePCR |
貨號(hào) | LZP7015 |
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
小鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)elisa試劑盒Anti-KNDC1研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞膜受體 細(xì)胞膜蛋白
兔多肽YY(PYY)elisa試劑盒Anti-KCNG4/KV6.3研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 激酶和磷酸酶 線粒體 泛素
豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)elisa試劑盒Anti-KY/Kyphoscoliosis peptidase研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 激酶和磷酸酶 線粒體 泛素
人程序性細(xì)胞死亡因子4(PDCD4)elisa試劑盒Anti-KLLN研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡
大鼠成纖維細(xì)胞生長因子13(FGF-13)elisa試劑盒Anti-KCTD18研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞報(bào)價(jià)Anti-Ketohexokinase研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞類型標(biāo)志物 細(xì)胞骨架
大鼠支氣管成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基報(bào)價(jià)Anti-KLRF1/NKp80研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
小鼠 IGFBP6 / IBP-6 蛋白 (His 標(biāo)簽)現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-KRG2/DDX11研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
氟苯尼考保存Anti-KMT3B/NSD1/ARA267研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
含青霉素價(jià)格Anti-KIF11/Eg5/TRIP5研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 新陳代謝
5-尿苷一磷酸價(jià)格Anti-KAT13A/SRC1研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 新陳代謝
α-甘油磷酸二鈉保存Anti-Keratan Sulfate研究領(lǐng)域 心血管 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶 新陳代謝
豚鼠腎素(Renin)elisa試劑盒Anti-Lysyl tRNA synthetase研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 新陳代謝
魚11-酮類固醇elisa試劑盒Anti-KDM5B/PLU1/Jarid1B研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞骨架
羊環(huán)磷酸腺苷(cAMP)elisa試劑盒Anti-KIST/UHMK1研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶 新陳代謝 表觀遺傳學(xué)
異葒草苷Measles virus of fusion protein 麻疹病毒抗原(麻疹病毒融合蛋白)TXNRD1 硫氧環(huán)蛋白還原酶1抗體
紫云英苷FSH-R(Follicle-stimulating hormone receptor precursor) 促卵泡刺激素受體抗原TXNIP 硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2抗體
對(duì)葉百部堿FSH(Follicle-stimulating hormone precursor) 促卵泡刺激素抗原TXNDC9 胚胎干細(xì)胞相關(guān)蛋白TXNDC9抗體
仙茅苷GABRA1(gamma-amibutyric acid (GABA) A receptor, alpha 1) γ1氨基丁酸A型受體α1抗原TXNDC5 硫氧還蛋白5抗體
R型人參皂苷Rh2GABAB1(GABAb Receptor 1) g-氨基丁酸B1受體(多肽)TXNDC4/ERP44 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白44抗體
白花前胡甲素GABABR2/GB2(GABA B Receptor 2) γ1氨基丁酸A型受體B2抗原TXA2R 血栓素A2受體抗體
白花前胡乙素GAD-67 (glutamate decarboxylase 67) 谷氨酸脫羧酶-67抗原Twist2 TWIST蛋白2抗體抗體
貝母辛GADD153(Growth arrest and DNA damage-inducible 153) 生長抑制DNA損傷基因153抗原TWIST protein TWIST蛋白抗體
地奧司明phospho GAP-43(pSer41)(phospho Growth associated protein 43 ) 磷酸化神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43抗原TWA1/C20orf11 20號(hào)染色體開放閱讀框11抗體
香蒲新苷GAPDH 3-磷酸甘油醛脫氫酶(人)抗原TUSC5 抑癌基因5抗體
猿分支桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書人Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃500毫克
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人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃100毫克
人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100毫克
人Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃100毫克