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恩杜姆病毒PCR檢測試劑盒說明書上海聯(lián)祖生物相關產品:RNASE檢測試劑盒對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。保存環(huán)境:2-8℃低溫、避光、防潮
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產品名稱 | 恩杜姆病毒PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Ndumu VirusRTPCR |
貨號 | LZP7047 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
L-Phenylglycil人胎盤羊膜細胞*培養(yǎng)基乙酸乙酯 AR,99%
DL-Phenylglycil人胎盤滋養(yǎng)層細胞*培養(yǎng)基乙酸乙酯 for HPLC, >99.0%(GC)
L-Proline人胎盤絨毛膜細胞*培養(yǎng)基甲溶液 AR,含10-15% 甲穩(wěn)定劑
D-Proline人平滑肌細胞*培養(yǎng)基甲 Standard for GC,>99.9%
DL-Proline人成纖維細胞*培養(yǎng)基甲 AR,99.5%
BOC-L-Proline人卵巢上皮細胞*培養(yǎng)基甲 CP,99.5%
BOC-D-Proline人卵巢成纖維細胞*培養(yǎng)基甲 AR,無級
L-Hydroxyproline人卵巢微血管內皮細胞*培養(yǎng)基甲 for HPLC, ≥99.9%
L-Threonine人內膜上皮細胞*培養(yǎng)基甲 農殘級, ≥99.9%
D-Theronine人頸上皮細胞*培養(yǎng)基甲 ≥99.9%(GC)
DL-Theronine人支持細胞*培養(yǎng)基甲 ACS
BOC-L-Threonine人腎小球內皮細胞*培養(yǎng)基甲 分析標準品,99.9%
CBZ-L-Threonine人腎管狀上皮細胞*培養(yǎng)基甲 電子級
L-Tryptophan人腎皮層上皮細胞*培養(yǎng)基甲 ACS 光譜級, ≥99.9%
D-Trytophan人腎上皮細胞*培養(yǎng)基甲 LC-MS,≥99.9%
DL-Trytophan人輸尿管上皮細胞*培養(yǎng)基甲 色譜級+, ≥99.9%
順鉑(標準品)PKA(Protein Kinase A) 蛋白激酶A(多肽)TFPI/LACI 組織因子途徑抑制劑抗體
酞普蘭PLAU/uPA (Plasmigen activator,urokinase) 尿激酶型纖溶酶原激活因子(多肽)TFF3 三葉肽因子3抗體
西酞普蘭(標準品)Podoplanin Protein 平足蛋白抗原TFF2 三葉肽因子2抗體
克拉曲濱,克拉利賓Pokemon (POK Erythroid Myeloid Ontogenic factor) “蒙”蛋白又稱“曼”蛋白TFF1/BCEI 癌雌激素誘導蛋白抗體
克拉霉素Polycystin 1(Polycystic Kidney Disease 1) 多囊腎蛋白1抗原TFEB T淋巴細胞轉錄調節(jié)因子TFEB抗體
克拉霉素(標準品)Polycystin 2(polycystic kidney disease 2) 多囊腎蛋白2抗體TFE3 轉錄因子E3
克林霉素磷酸酯phospho-AKT1/PKB1/2/3(pThr473)peptide 磷酸化蛋白激酶B抗原(絲氨酸磷酸化位點:473)TFDP3 轉錄因子DP3抗體(肝癌相關抗原661)
克林霉素磷酸酯(標準品)RKIP(Raf kinase inhibitor protein) Raf激酶抑制蛋白抗原TFDP2/DP2 轉錄因子E2F二聚體蛋白2抗體
酸氯倍他索pre-X protein[Hepatitis B virus]N-Terminus 乙肝病毒pre-X蛋白抗原(N端)TFCP2C 轉錄因子CP2抗體
克羅拉濱/氯法拉濱pre-X protein(CT)[Hepatitis B virus C-Terminus] 乙肝病毒pre-X蛋白抗原(C端)TFAR19/PDCD5 凋亡相關蛋白5抗體
恩杜姆病毒PCR檢測試劑盒說明書人表面膜免疫球蛋白D(mIgD)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT200毫升
人表面膜免疫球蛋白M(mIgM)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:5克
人表皮角蛋白(EK)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃1克
人表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500克
人丙氨酸轉氨酶/谷丙轉氨酶(ALT/GPT)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃5克
人丙二(MDA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1米
人丙酸激酶(PK)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
人丙酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500支/包
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。