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東方蜜蜂微孢子蟲PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:ATA檢測(cè)試劑盒 操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿防護(hù)、戴手套等
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 東方蜜蜂微孢子蟲PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書 |
英文名稱 | Nosema ceranaePCR |
貨號(hào) | LZP7075 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
Proteinase K莰烯 95%黃磷 GR()
Proteinase K solution(+/-)-兒茶精 分析標(biāo)準(zhǔn)品過(guò)氧乙酸 AR,18-20%
Pepstatin A(+/-)-兒茶精 96%過(guò)氧乙酸 21-25%
Rnasin Inhibitor(+)-兒茶素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%過(guò)氧乙酸 26-30%
STI(+)-兒茶素 98%過(guò)氧乙酸 31-35%
Aprotinin咖啡酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品過(guò)氧乙酸 36-40%
AMV Reverse transcriptase腦磷脂 98%,氬氣封裝過(guò)氧乙酸 41-45%
M-MLV Reverse transcriptase桂皮 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%過(guò)氧乙酸 46-50%
SuperScript II Reverse Transcriptase桂皮 98%過(guò)氧乙酸 高純度,醫(yī)用級(jí),5%(1Gal/PE)
CIAP結(jié)晶紫 分析標(biāo)準(zhǔn)品過(guò)氧乙酸 15-17%
Urease(jack bean)環(huán)庚烷 97%發(fā)煙硫酸 AR
Leupeptin(S)-(-)-β-香茅 99%發(fā)煙硫酸 65%
Thio-NAD檸檬酸 一 ≥99.9998% metals basis結(jié)晶四氯化錫 AR,99.0%
β-DPN細(xì)胞松弛素B 98%結(jié)晶四氯化錫 99.995% metals basis
β-DPNH葉綠素b 95%硫脲 AR,99%
NADH Inhibitor4-氯苯甲 分析標(biāo)準(zhǔn)品硫脲 CP,98%
醋酸舍莫瑞林 Leptin receptor 瘦素受體(抗原)Snail/SNAI 1 Snail蛋白抗體
磺胺嘧啶銀Lpin1 protein Lpin1 protein(抗原)SNAI2/SLUG 鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug抗體
磺胺嘧啶銀(標(biāo)準(zhǔn)品)Lumbrokinase 蚯蚓纖溶酶(蚓激酶抗原)SMYD4 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SMYD4抗體
辛伐他汀 Livin (Inhibitors of apoptosis proterins Livin) 一種新的凋亡抑制蛋白(抗原)SMYD3 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SMYD3抗體
辛伐他汀,辛伐他?。?biāo)準(zhǔn)品)p38 MAPK/MKK3/MAPKK14 絲裂原活化蛋白激酶p38(抗原)SMYD2 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SMYD2抗體
康普瑞汀磷酸二鈉鹽Metal ion transporter 擬南介金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(抗原)SMURF2 Smad蛋白E3泛素連接酶2抗體
硫酸西梭米星/硫酸西索霉素MADCAM-1 黏膜選址素(抗原)SMURF1 Smad蛋白E3泛素連接酶1抗體
硫酸西梭米星(標(biāo)準(zhǔn)品)MAG-a/b (Myelin associated glycoprotein; L / S -MAG;) 髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b(抗原)SMS2/Sphingomyelin Synthase 2 鞘磷脂合成酶2抗體
生長(zhǎng)抑素MAG (Myelin associated glycoprotein; L-MAG;MAG-a ) 髓鞘相關(guān)糖蛋白(抗原)Smoothened/SMO 跨膜蛋白Smoothened抗體
甲苯磺酸索拉非尼MMP-1(Mous ematrix metalloproteinases-1) 基質(zhì)金屬蛋白酶-1(小鼠抗原)SMOC2 分泌模塊化鈣結(jié)合蛋白2抗體(平滑肌相關(guān)蛋白2)
東方蜜蜂微孢子蟲PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書人干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1公斤
人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1000只/袋
人干細(xì)胞因子受體(SCFR)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1包
人剛地弓形蟲(T.gondii)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1000只/袋
人高爾基蛋白73(GP-73)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
人高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1塊
人高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1000只/袋
人高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1包
檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。