注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
Pronase E4-雄烯-11β--3,17-二酮2-氯-5-甲酸 99%

Antipain dihydrochloride2,2-雙[4-(4-氨基苯氧基)苯基]烷 98%2-氯二苯甲酮 99%

Cholesterol esterase3-溴肉桂酸 98%4-氯-4'-羥基二苯甲酮 98%

Amyloglucosidase from aspergillus niger1，4-二（*基硅烷基）苯 96%二苯 99%

Acetyl CoA二甲基烯酸1,4-丁二酯, 含100ppm MEHQ 穩(wěn)定劑, 95%4,4'-二氯二苯甲酮 99%

Glucose oxidase二烯酸1,3-丁二酯, 含500 ppm 對苯二酚（HQ）穩(wěn)定劑, 98%2,4-二羥基二苯甲酮 99%

D-AAO苯磺酸 98%4,4'-二羥基二苯甲酮 98%

Hexokinase from Saccharomyces cerevisiae 正丁硫 standard for GC, ≥99% (GC)2-羥基-4-甲氧基-5-磺酸二苯甲酮 98%

Pepsin（porcine stomach mucose）N-丁基二乙胺 99%4-羥基二苯甲酮 98%

Pancreatin雙酚A三雙甲基烯酸酯 試劑級2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮 99%

Trypsin(bovine pancreas) 1-芐基哌 97%4-甲基二苯甲酮 98%

Trypsin(porcine pancreas)3-溴苯酚 分析標準品，用于環(huán)境分析4,4'-二氟二苯甲酮 99%

Lipase(pocine pancreas)苯甲 無級, 99.8%4-硝基二苯甲酮 99%

Lipase(Candida)乙基叔丁基 分析標準品2-苯基苯并咪唑  98%

CAT4-叔丁基吡啶 98%苯氧乙酸鈉 98%

Lysozyme(Chinken egg)鄰苯二甲酸丁芐酯 分析標準品1,4-萘醌 95%

甲磺酸雷沙吉蘭HIF-1Alpha  缺氧誘導因子1α 多肽SOX10  轉(zhuǎn)錄因子SOX10抗體

白藜蘆histone H3-like protein  組蛋白H3樣蛋白多肽SOSSC/C9orf80  單鏈DNA結(jié)合蛋白相互作用蛋白1

白藜蘆（標準品）histone H3-like protein  組蛋白H3樣蛋白（C端多肽）Sortilin/NTR3/Gp95  神經(jīng)降壓素受體3抗體（糖蛋白95）

瑞替加濱堿histone H3-like protein  組蛋白H3樣蛋白（N端多肽）SorLA/LRP9  低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白9抗體

瑞替加濱HIV-1(human immudeficiency virus type 1)  艾滋病病毒-1/人類免疫缺陷病毒1型(抗原)SORBS2/ArgBP2  精氨酸結(jié)合蛋白2抗體

利巴韋林HIV-1(human immudeficiency virus type 1)  艾滋病病毒-1/人類免疫缺陷病毒1型(抗原)SORBS2/ArgBP2  精氨酸結(jié)合蛋白2抗體

利巴韋林（標準品）Measles virus protein(Plant2 derived measles virus hemagglutinin protein)  麻疹病毒紅血球凝集素蛋白多肽Somatostatin/GRIH  生長抑素抗體

硫酸核糖霉素Measles virus protein(Plant2 derived measles virus hemagglutinin protein)  麻疹病毒紅血球凝集素蛋白多肽Solute carrier family 1  溶質(zhì)攜帶物家族-1抗體

利福布丁HMGB1 (High Mobility Group Box protein 1)  高遷移率族蛋白-1(抗原)SODD  Bcl2結(jié)合抗凋亡蛋白4抗體

利福布丁（標準品）HSL(hormone-sensitive lipase)  荷爾蒙敏感脂肪酸（抗原）SOD4/CCS  超氧化物歧化酶4抗體
諾如病毒型PCR檢測試劑盒規(guī)格人富組蛋白(HTN5)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10個

人鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人鈣離子通道抗體(VGCC)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃500ul

人鈣聯(lián)蛋白(CNX)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT250克

人鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

人鈣調(diào)磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：250克

人鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫升
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。