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犬新孢子蟲PCR檢測試劑盒說明書

產(chǎn)品簡介

犬新孢子蟲PCR檢測試劑盒說明書
上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
TP檢測試劑盒本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)

更新時間:2021-03-13
訪問次數(shù):593
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注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 產(chǎn)品名稱

 犬新孢子蟲PCR檢測試劑盒說明書

 英文名稱

 Neospora caninumPCR

 貨號

 LZP7059

組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
β-Alanine methyl ester hydrochloride大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細胞*培養(yǎng)基間硝苯 GR,99.0%

L-Aspartic acid dimethyl ester hydrochloride大鼠海馬神經(jīng)元細胞*培養(yǎng)基對甲苯胺 AR,99.0%

D-Aspartic acid dimethyl ester hydrochloride大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基對甲苯胺 99.7%

L-Aspartic acid β-methyl ester hydrochloride大鼠腦成纖維細胞*培養(yǎng)基間甲苯胺 GR,99%

L-Histidine methyl ester dihydrochloride大鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞*培養(yǎng)基間甲苯胺 CP

DL-Alanine methyl ester hydrochloride大鼠雪旺氏細胞*培養(yǎng)基間甲苯胺 分析標準品,>99.7%

DL-Serine methyl ester hydrochloride大鼠小腦顆粒細胞*培養(yǎng)基土霉素  97%

L-Cysteine ethyl ester hydrochloride大鼠嗅鞘細胞*培養(yǎng)基1,1-二甲硫基硝基乙烯 98%

L-Tyrosine ethyl ester大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基2-溴-3-甲基吡啶 97%

DL-Alanine ethyl ester hydrochloride大鼠小梁網(wǎng)細胞*培養(yǎng)基5-溴-2-氟吡啶 98%

D-phenylglycine ethyl ester•HCl大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞*培養(yǎng)基(R)-(+)-N-叔丁氧羰基-3-氨基吡咯烷 97%

L-Arginine methyl ester dihydrochloride大鼠視網(wǎng)膜muller細胞(s)-(-)-N-叔丁氧羰基-3-氨基吡咯烷 98%

L-Tyrosine tert-butyl ester大鼠虹膜色素上皮細胞*培養(yǎng)基氯代二苯基膦 97%

N-Acetyl-L-tryptophan大鼠晶狀體上皮細胞*培養(yǎng)基5-氯-2-氟吡啶 99%

N-Acetyl-L-isoleucine大鼠角膜上皮細胞*培養(yǎng)基二苯基次膦酰氯 98%

N-Acetyl-L-lysine大鼠角膜內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基二苯基磷酸 99%

鹽酸伊立替康,(CPT-11)TRAF3/CD40bp (CD40 binding protein)  腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白3抗原SUGT1  SUGT1蛋白抗體

鹽酸伊立替康(標準品)TRAF6 (TNF receptor-associated factor 6)  腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6抗原SUFU/Suppressor of Fused  抑制Hh信號通路蛋白SUFU抗體

硝酸異康唑TRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand)  腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體/凋亡素2配體抗原Substance P Receptor/NK1R  P物質(zhì)受體抗體

硝酸異康唑(標準品)TRBF1 (Telomeric repeat binding factor 1)  端粒體復制結(jié)合因子1抗原Substance P  P物質(zhì)抗體

異維A酸TRIM32(tripartite motif protein 32)  TRIM32抗原Styk1  絲氨酸/蘇氨酸/酪氨酸激酶STYK1抗體

異維A酸(標準品)Trop-2/Tpm2 peptide  原肌球蛋白抗原STXBP1/Munc18  神經(jīng)突觸前膜胞內(nèi)蛋白18抗體

美羅培南TSARG4(Testis and spermatogenesis related gene 4)  生精細胞凋亡相關(guān)基因4抗原streptomycin  鏈霉素抗體

美羅培南(標準品)TSGF(Tumor Specific Growth Fanctor)  惡性腫瘤特異性生長因子抗原Streptokinase  鏈激酶抗體

硫酸卡那霉素CIDEB peptide  CIDEB抗原Streptococcus suis 2  小鼠抗2型豬鏈球菌菌體蛋白抗體

硫酸卡那霉素(標準品)Tsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein)  Tsg101抗原Streptococcus suis 2  2型豬鏈球菌菌體蛋白抗體
犬新孢子蟲PCR檢測試劑盒說明書人蛋白二化物異構(gòu)酶前體(PDI)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:500毫升

人蛋白激酶A(PKA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT,避光5克

人蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT25克

人蛋白激酶C(PKC)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT1克

人蛋白聚糖(PG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

人蛋白酪氨酸激酶(PTK/CD115)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT10克

人蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP/PTPase/CD148)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:500克

人蛋白磷酸酶(PP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:5克
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

 

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