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*線蟲通用PCR檢測試劑盒廠家上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:ADAM10檢測試劑盒 細(xì)胞培養(yǎng):血清、培養(yǎng)基、平衡鹽溶液、輔助添加試劑、細(xì)胞檢測試驗(yàn)。
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
RELATED ARTICLES注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | *線蟲通用PCR檢測試劑盒廠家 |
英文名稱 | Nematodirus spp.PCR |
貨號 | LZP7058 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
L-Prolil大鼠前脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基聚乙二單甲 平均分子量1000
Creatine大鼠成骨細(xì)胞*培養(yǎng)基蒽酮 AR
N-Acetyl-L-Valine大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基N-乙酰-D-半乳糖胺,合 98%
N-Acetyl-DL-tryp tophane大鼠胎兒成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基偶氮二甲酸二異酯 95%
N-Acetyl-glycine大鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞*培養(yǎng)基偶氮二甲酸二叔丁酯 98%
D-Tryptophan methyl ester hydrochloride大鼠成年表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞*培養(yǎng)基4,4-二溴聯(lián)苯 98%
L-Cysteine methyl ester hydrochloride大鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞*培養(yǎng)基3'-羥基苯乙酮 98%
D-Phenylalanine methyl ester hydrochloride大鼠皮下脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基硫酸新霉素 USP級,680 I.U./mg
L-Alanine methyl ester hydrochloride大鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基土霉素 97%
D-Alanine Methyl Ester Hydrochloride大鼠表皮黑色素細(xì)胞*培養(yǎng)基異酸苯酯 99%()
D-Proline methyl ester hydrochloride大鼠腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基鄰硝苯 99%
L-Tyrosine methyl ester hydrochloride大鼠腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基對硝苯 99%
D-Tyrosine Methyl ester hydrochloride大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基間硝苯 CP
D-Leucine methyl ester hydrochloride大鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基間硝苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品
D-Serine methyl ester hydrochloride大鼠腦膜細(xì)胞*培養(yǎng)基間硝苯 standard for GC, ≥99.5% (GC)
D-Valine methyl ester hydrochloride大鼠神經(jīng)元細(xì)胞*培養(yǎng)基間硝苯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑:甲
氫氯噻(標(biāo)準(zhǔn)品)TNF- Beta(Tumor Necrosis Factor- Beta) 腫瘤壞死因子-β抗原surface layer protein 乳酸細(xì)菌表面蛋白抗體
醋酸TNFAIP1(Tumor necrosis factor-alpha-induced protein 1) 腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗原SUR1 磺酰脲類藥物受體1抗體
醋酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Acetylated-P53(Lys382) peptide 抗腫瘤P53抗原SUPT16H/CDC68 染色體特異性轉(zhuǎn)錄延伸因子抗體
鹽酸伊達(dá)比星TP I (topoisomerase I ) 拓普西異構(gòu)酶Ⅰ抗原SUMO-1/UBC9 泛素蛋白連接酶E2I抗體
甲磺酸伊馬替尼TOPO II Alpha/DNA TP II Alpha (DNA topoisomerase II Alpha) DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅱ抗原SUMO 1 類泛素蛋白抗體
甲磺酸伊馬替尼(標(biāo)準(zhǔn)品)TPH (Trptophan Hydroxylase) 色氨酸羥化酶(多肽)SULT2A1 膽鹽磺基轉(zhuǎn)移酶
咪喹莫特TRA16 (Testicular orphan nuclear receptor-4 (TR4)-associated protein) 激素受體相關(guān)蛋白/孤兒素受體相關(guān)蛋白(抗原)SULT1E1/Estrogen Sulfotranferase 雌激素硫酸轉(zhuǎn)移酶抗體
咪喹莫特(標(biāo)準(zhǔn)品)TRADD(TNF receptor 1 associated via death domain) 有死亡區(qū)的腫瘤壞死因子受體1相關(guān)蛋白抗原SULT1A1 芳基磺基轉(zhuǎn)移酶1抗體
伊立替康TRAF1 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子1抗原Sulfatase 2 硫酸酯酶2蛋白抗體
伊立替康(標(biāo)準(zhǔn)品)TRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2) 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子2抗原Sulfatase 1 硫酸酯酶1抗體
*線蟲通用PCR檢測試劑盒廠家人膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT500克
人膽酸(CA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500克
人彈性蛋白(ELN)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1克
人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃100毫克
人蛋白C(ProteinC)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:5克
人蛋白S(ProteinS)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:0.25毫升
人蛋白Z(ProteinZ)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT5克
人蛋白二化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃100毫升
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。