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傘枝梨頭霉PCR檢測試劑盒規(guī)格相關(guān)產(chǎn)品:人甲基化CpG結(jié)合蛋白2(MECP2)elisa試劑盒Anti-Mouse CD62P DyLight 488 conjugated Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 免疫學 轉(zhuǎn)運蛋白人極低密度脂蛋白(VLDL)elisa試劑盒Anti-human Transferrin Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導人白介素-21(IL-
產(chǎn)品分類
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試劑盒簡介:
宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒(磁珠法)用于樣本的前處理,可穩(wěn)定高效地提 取出樣本中殘留的痕量宿主 DNA。
試劑盒組分:
序號 | 試劑 | 規(guī)格 | 儲存條件 |
1 | 裂解液 | 15ml×1 瓶 |
室溫 |
結(jié)合液(異丙醇) | 空瓶 | ||
洗滌液 | 40ml×2 瓶 | ||
樣本稀釋液 | 15ml×1 瓶 | ||
5M NaCl | 1ml×1 管 | ||
蛋白酶 K | 1ml×1 管 | ||
磁珠 | 6ml×1 瓶 | ||
洗脫液 | 10ml×1 瓶 | ||
2 | 肝糖原 | 1ml×1 管 | -20oC |
tRNA | 50ul×1 管 |
有效期: 12 個月
宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒實驗流程(手工操作):
注: 在開展實驗前, 請用精密 pH 試紙條測定樣本的 pH 值并將樣本 pH 值調(diào)節(jié)至 6-8.
實驗準備
↓
樣本準備
↓
樣本消化
↓
DNA 捕獲
↓
洗滌
↓
DNA 洗脫
實驗操作細則:
一、 樣本處理:
1. 取 100ul 待檢樣本至 1.5ml 干凈的離心管中,加入 10ul 5M NaCl 溶液,用渦旋 振 蕩器充分震蕩 10 秒;
2. 加入 10ul 蛋白酶 K,在渦旋振蕩器上充分震蕩 10 秒;
3. 配制新鮮的裂解液,其組成為: 130ul 裂解液/100ul 樣本, 9ul 肝糖原/100 樣本, 0.2ul tRNA/100ul 樣本,充分混勻以制成新鮮配制的裂解液;
4. 將 139ul 新鮮配制的裂解液加入到樣本管中, 然后用渦旋振蕩器充分震蕩 10 秒, 取出短 暫快速離心 5 秒,然后放置在 56oC 孵育 30 分鐘;
二、 DNA 捕獲:
1. 將磁珠充分渦旋振蕩以*重懸;
2. 將樣本管從孵育器中取出, 進行簡短的離心,將液體收集到管底,然后加入*重懸的 磁珠 60ul 和 230ul 結(jié)合液,在渦旋振蕩器上充分震蕩 10 秒; (注意: 在加入磁珠時, 需經(jīng) 常振蕩重懸磁珠, 以保證吸取時磁珠的均勻性。建議每加 3-4 組樣本后, 重懸磁珠后再進行 后續(xù)樣本的添加)
3. 將震蕩后的樣本管,置于旋轉(zhuǎn)混勻器或渦旋振蕩器上 10 分鐘以進行磁珠捕獲;
4. 將樣本管從旋轉(zhuǎn)混勻器上取下,在 10000g 的條件下離心 1 分鐘使磁珠充分聚集;
5. 將離心后的樣本管置于磁力架上, 待溶液*澄清后, 用槍頭小心移去上清(注: 避免 槍頭攪動磁珠,使得磁珠同上清一起被除去從而影響得率);
三、宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒 洗滌:
1. 樣本管移去上清后,不必將樣本管從磁力架上取下,直接加入 400ul 洗滌液;
2. 待溶液*澄清后,磁珠*分離,用槍頭小心移去上清;
3. 保持樣本管在磁力架上, 加入 400ul 洗滌液, 待溶液澄清, 磁珠*分離后, 用槍頭小 心移去上清;
4. 將樣本管從磁力架上取下, 于 10000g 的條件下離心 30 秒,使得殘留的洗滌液*聚集 到管底;
5. 將樣本管置于磁力架上,待磁珠*分離后,用 10ul 槍頭小心移除殘留的液體;
6. 將樣本管從磁力架上取下,置于 70oC 金屬浴中,放置 4 分鐘, 除去殘留的乙醇(注: 若干燥不夠, 殘留的乙醇會影響后續(xù)的定量檢測反應);待磁珠團出現(xiàn)裂紋時,將樣本管從 金屬浴中取出進行 DNA 洗脫;
四、 DNA 洗脫:
1. 沿著樣本管的管壁加入 50- 100ul 洗脫液,用 100ul 的槍頭反復吹吸,以*重懸磁珠;
2. 將樣本管置于 70oC 孵育器孵育 10 分鐘;
3. 將樣本管從孵育器中取出,于 20000g 離心 2 分鐘,然后至于磁力架上,待磁珠*分 離后,用 10ul 槍頭小心將上清液體轉(zhuǎn)移至新的干凈的離心管中;
4. 為了避免吸入磁珠,在離心管中還剩余少量液體時,將其于 20000g 離心 2 分鐘,然后 至于磁力架上以吸出剩余的液體。
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異常漢遜酵母變種 支/瓶
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