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H22細(xì)胞公司相關(guān)產(chǎn)品:鳥嘌呤核苷酸交換因子FARP2抗體KLK10/FITC 熒光素標(biāo)記激肽釋放酶10抗體IgGFK506結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白抗體(他克莫司相關(guān)蛋白)KLK14/FITC 熒光素標(biāo)記激肽釋放酶14抗體IgG
產(chǎn)品分類
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英文簡稱:H22細(xì)胞
貨號:LZ-X969525
規(guī)格:T25
生長特性:懸浮+部分貼壁
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價,產(chǎn)品貨期短,價格優(yōu),售后齊全。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細(xì)菌或真菌污染,會嚴(yán)重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細(xì)胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1膠質(zhì)纖維酸性蛋白(抗原)血糖含量測試盒快速硫化氫試驗瓊脂
凋亡相關(guān)蛋白3抗體腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗原植物可溶性糖含量測試盒DNA酶甲基綠瓊脂基礎(chǔ)
肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體基質(zhì)金屬蛋白酶-1糖原含量測試盒馬尿酸鈉培養(yǎng)基
ATP結(jié)合蛋白家族7抗體基質(zhì)金屬蛋白酶-2(多肽抗原)海藻糖含量測試盒快速硫化氫(H2S)試驗瓊脂
ASCL2蛋白抗體基質(zhì)金屬蛋白酶-3(抗原)山梨含量測試盒波爾頓選擇性增菌肉湯
磷酸化脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體基質(zhì)金屬蛋白酶-7(抗原)山梨脫氫酶測試盒CCDA基礎(chǔ)
磷酸化活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體金屬基質(zhì)蛋白酶-14β-葡萄糖酸苷酶(β-GD)試劑盒CCDA添加劑
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體GDNF家族受體α-1(抗原)NADPH-色素C還原酶(NCR)測試盒Campy-Cefex 瓊脂基礎(chǔ)
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體血管緊張素II抗原色素b5含量測試盒Campy-Cefex 添加劑
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2(抗原)血濃度測試盒甘露卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)(MYP)
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體心鈉肽(心鈉素)抗原血鈣濃度測試盒胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎(chǔ)
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體GDNF家族受體α-4(抗原)血清鐵濃度測試盒改良V-P培養(yǎng)基
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體生長激素釋放激素(因子)(抗原)血鎂濃度測試盒胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ)
活化轉(zhuǎn)錄因子5抗體血管位蛋白樣1/血管生成素樣蛋白-1抗原血磷濃度測試盒酪蛋白瓊脂
活化轉(zhuǎn)錄因子6β抗體葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(抗原)血鈉濃度測試盒酚紅葡萄糖肉湯
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