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NCI-H1341細胞

產品簡介

NCI-H1341細胞公司相關產品:
三化組蛋白H3抗體Goat Rabbit IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記羊抗兔IgG
乙?;M蛋白H3抗體Goat Bovine IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記羊抗牛IgG

更新時間:2021-08-30
訪問次數(shù):539
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產品名稱:小細胞肺癌細胞
英文簡稱:NCI-H1341細胞

貨號:LZ-X968954
規(guī)格:T25
生長特性:懸浮生長

圖片2.jpg 

凍存培養(yǎng)基:
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經過優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低  1°C?;蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

圖片2.jpg 

實驗材料: 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數(shù)板1塊; 
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把; 
8、酒精燈1臺;

實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
   2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
   5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

1-二苯-3-羥氮雜環(huán)丁烷鹽鹽Hyphomicrobium zavarzinii拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

1-二苯-3-羥氮雜環(huán)丁烷鹽鹽釀酒酵母拉丁屬名: Chryseobacterium  wanjuense

3,5-二完州郡金黃桿菌拉丁屬名: Janibacter melonis

3,5-二檸檬兩面神菌拉丁屬名: Saccharothrix espanaensis

3,5-二西班牙糖絲菌拉丁屬名: Salmonella enterica subsp. enterica

(+)-Biotin-PEG6-OH腸沙門氏菌腸炎亞種拉丁屬名: Gillisia sp.

(對傘花烴)釕(II)二聚體Gillisia sp.注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

(對傘花烴)釕(II)二聚體酒香酵母拉丁屬名: Rhizopus  oryzae

λ-角叉膠米根霉拉丁屬名: Exserohilum turcicum

λ-角叉膠大斑凸臍蠕孢拉丁屬名: Bacillus subtilis subsp. subtilis

(S)-4-芐-2-惡唑烷枯草芽孢桿菌枯草亞種注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

(S)-4-芐-2-惡唑烷葡萄座腔菌拉丁屬名: Bacillus  pumilus

(S)-4-芐-2-惡唑烷短小芽孢桿菌用途: 植物病原物,為該病防治提供依據(jù)。

2,4,6-三(二氨)苯酚菊池鏈格孢拉丁屬名: sp.

2,4,6-三(二氨)苯酚鏈球菌(不定種)拉丁屬名: Escherichia  coli

β-內酰酶大腸埃希氏桿菌拉丁屬名: Bacillus cereus
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注意事項:
     盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染,會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。
     熒光物質均易發(fā)生淬滅,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞,并且通過調整相關設置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產品于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 


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