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ANA中性粒細(xì)胞抗體ELISA試劑盒公司正在銷售的產(chǎn)品:IL-17E/IL-25/FITC 熒光標(biāo)記白介-17E抗體IgG苯磺酰肼 98%IL-17F/IL-24/FITC 熒光標(biāo)記白介-17F抗體IgGT 三水合物 AR,99.0%IL-18R Alpha/FITC 熒光標(biāo)記白介-18受體α鏈抗體IgG對(duì)苯磺酯 98%IL-18R Beta/IL1R7/CD218b/FITC 熒光
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | ANA中性粒細(xì)胞抗體ELISA試劑盒 |
英文名稱 | ANA ELISA Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 48T/96T |
產(chǎn)品貨號(hào) | LZ-E028593 |
需要而未提供的試劑和器材:
1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2. 高速離心機(jī)
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測(cè)樣品較多時(shí),用多通道移液器
6. 蒸餾水,容量瓶等。
標(biāo)本要求:
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
備試劑與收集血樣:
1. 收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè), 2-8 ℃ 保存48 小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管,管加標(biāo)本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。
3. 10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
檢測(cè)程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
生長(zhǎng)激素結(jié)合蛋白(P)試劑盒 吳茱萸內(nèi)酯亞硝 CP,95%5-吲哚 99%
生長(zhǎng)激素結(jié)合蛋白(P)試劑盒 吳茱萸新四草,二水 PT2-異煙 97%
上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒 吳茱萸總偏磷 AR肉桂酰 97%
上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒 五-O-乙酰-β-D-吡喃葡萄糖鍺試劑 AR3-肉桂 98%
免疫反應(yīng)性生長(zhǎng)激素(irGH)試劑盒五水合硫司巴丁鍺試劑 97%2-芐 99%
免疫反應(yīng)性生長(zhǎng)激素(irGH)試劑盒五味子素高 99.99% metals basis2--5- 99%
硫褪黑色素(MS)試劑盒五味子N-苯鄰氨苯(釩試劑) AR,95%2--5-苯 97%
硫褪黑色素(MS)試劑盒五味子乙N-苯鄰氨苯(釩試劑) 98%4-吲哚 98%
長(zhǎng)效狀腺激素(LATS)試劑盒 五味子酚焦銻 AR,99.0%2-苯 98%
長(zhǎng)效狀腺激素(LATS)試劑盒 五味子酚乙1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 AR,90.0% 2-硫-5-嘧啶-4- 95%
上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒 五味子素1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 98%2--4-硝吡啶 98%
上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒 五味子乙素多乙烯多 AR4-吲哚 98%
免疫反應(yīng)性生長(zhǎng)激素(irGH)試劑盒五味子酯檸檬二氫 AR,98.0%2--6-氟苯 98%
免疫反應(yīng)性生長(zhǎng)激素(irGH)試劑盒五味子酯戊氟氫化 AR,99.0%2--N,N-二乙酰 97%
抗利尿激素/血管加壓素/精氨加壓素(ADH/VP/AVP)試劑盒五味子酯乙氟氫化 CP,98.0%4--2-三氟喹啉 97%
抗利尿激素/血管加壓素/精氨加壓素(ADH/VP/AVP)試劑盒西貝母N-苯硫脲 98%2--4-吡啶 95%
ANA中性粒細(xì)胞抗體ELISA試劑盒本染色液是一種組織或細(xì)胞染色時(shí)常用的可以把細(xì)胞核染成綠色或藍(lán)綠色,把細(xì)胞漿和細(xì)胞核中的核仁染成紅色的染色液。甲基綠可以和細(xì)胞核中的DNA結(jié)合,從而產(chǎn)生細(xì)胞核染色;而派洛寧可以和細(xì)胞漿或核仁中的RNA結(jié)合,從而可以使細(xì)胞漿和核仁被染色。改進(jìn)了染色液配制方法,不含很多甲基綠-派洛寧染色液中使用的劇毒甲醇。本染色液可以和免疫熒光染色或免疫組化染色配合使用。一方面可以在本甲基綠-派洛寧染色液染色后進(jìn)行免疫熒光染色或其它染料的染色,另一方面也可以在免疫組化染色后再進(jìn)行甲基綠-派洛寧復(fù)染。一個(gè)包裝的本染色液至少可以染色200個(gè)樣品。
注意事項(xiàng):
1. 需自備4%多聚、70%乙醇和95%乙醇。如果需要脫水、透明和封片處理,還需自備二甲苯,中性樹膠或其它封片劑。如果樣品是石蠟切片,需自備90%乙醇,無(wú)水乙醇以及二甲苯。
2第一次使用本試劑盒時(shí)建議先取1-2個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
儲(chǔ)存條件:室溫避光,有效期一年。
操作步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。