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Hep3B2.CQ-E7細(xì)胞

產(chǎn)品簡介

Hep3B2.CQ-E7細(xì)胞公司相關(guān)產(chǎn)品:
磷酸化GATA結(jié)合蛋白3抗體MT/FITC 熒光素標(biāo)記金屬硫蛋白抗體IgG
延伸因子G2抗體MTA1/FITC 熒光素標(biāo)記腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1抗體IgG

更新時間:2021-08-30
訪問次數(shù):594
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產(chǎn)品名稱:肝癌細(xì)胞;Hep3B2.CQ-E7
英文簡稱:Hep3B2.CQ-E7細(xì)胞

貨號:LZ-X968386
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁生長

圖片2.jpg 

凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低  1°C?;蛘?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

圖片2.jpg 

實(shí)驗材料: 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊; 
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把; 
8、酒精燈1臺;

實(shí)驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

綿羊泛素蛋白D(UBD)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒N-十二烷-2-吡咯烷傳染性法氏囊病病拉丁屬名: 化妝品  金黃色葡萄球菌(陽性)

綿羊抗補(bǔ)體1q抗體(C1q-Ab)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  2-苯氧苯化妝品  金黃色葡萄球菌(陽性)注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

綿羊煙酰腺嘌呤二核苷磷氧化酶4(NOX4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2-苯氧苯葡萄座腔菌拉丁屬名: perfringens Type A

綿羊和肽素(CPP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2-苯氧苯產(chǎn)氣莢膜梭菌 素A型拉丁屬名: Planococcus halocryophilus

綿羊免疫球蛋白G2(IgG2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2'-氨-2'-脫氧尿苷嗜鹽動性球菌拉丁屬名: Fusarium proliferatum var. proliferatum

綿羊骨成型蛋白1(BMP-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2'-氨-2'-脫氧尿苷層出鐮孢原變種用途: 進(jìn)行分析檢測及抗病性鑒定,指導(dǎo)生產(chǎn)。

綿羊胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Etravirine (TMC125)立枯絲核菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

綿羊激酶錨定蛋白1(AKAP1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 聚乙二烯酯榆黃蘑用途: 生產(chǎn)代謝產(chǎn)物

綿羊酪氨激酶2(Tyk-2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3-羧苯頻哪酯深色殼囊孢注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用

綿羊信號素3A(SEMA3A)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3-羧苯頻哪酯蟬花拉丁屬名: Flavobacterium hydatis

綿羊胎盤蛋白(PP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3-乙氧羰苯頻哪酯水生黃桿菌拉丁屬名: Mucor corticola

綿羊C型鈉尿肽(CNP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3-乙氧羰苯頻哪酯皮生毛霉拉丁屬名: Rhizopus  nigricans

綿羊顆粒酶K(GZMK)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 4-吡唑頻哪酯黑根霉拉丁屬名: Blastococcus sp.

綿羊脫氫表雄(DHEA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 4-吡唑頻哪酯芽殖球菌屬拉丁屬名: Cunninghamella echinulata var. verticillata

綿羊中性粒彈性蛋白酶(NE/ELA2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  對苯乙烯磺鈉水合物孢小克銀漢霉輪生變種拉丁屬名: Bacillus subtilis

綿羊神經(jīng)特異性烯化酶(NSE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒對苯乙烯磺鈉水合物枯草芽胞桿菌拉丁屬名: Lactococcus lactis subsp. hordniae
Hep3B2.CQ-E7細(xì)胞雞芳硫酸酯酶A(ARSA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Anti-phosphoM-CSF Receptor(Tyr546) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化巨噬集落激因子受體抗體IgG

雞胰島素受體(INSR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-GDF-1/FITC  熒光素標(biāo)記抗生長、分化因子1抗體IgG

雞纖調(diào)蛋白(FMOD)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-GDF-8/FITC  熒光素標(biāo)記肌生長抑制素抗體IgG

雞神經(jīng)髓鞘蛋白(p2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-GDF8/MSTN/FITC  熒光素標(biāo)記羊抗生長分化因子8/肌肉抑制素抗體IgG

Sp100核抗原(Sp100)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-GDF-9/FITC  熒光素標(biāo)記抗生長、分化因子9抗體IgG

雞生存素(Surv)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-GDNF/FITC  熒光素標(biāo)記膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體IgG

雞骨鈣素(OC/BGP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-GDNF Receptor alpha 2/FITC  熒光素標(biāo)記膠質(zhì)系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子受體alpha抗體IgG

雞乙酰輔酶A(A-CoA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-phospho-Arhgef2 (Ser810)/FITC  熒光素標(biāo)記抗人、大、小鼠磷酸化Rho鳥苷酸交換因子2抗體IgG
注意事項:
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染,會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

 


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TEL:021-61210612

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