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單純皰疹病毒(HSV)核酸試劑盒規(guī)格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:檀芪(標準品)N,N-二甲基紫檀芪,紫檀1-硝基烷魚藤酮酸酯7-表紫杉(標準品)甲基-2-戊酮蛋白激酶B3CTn1/FITC 熒光素標記心肌肌鈣蛋白IgG100 ul肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdinc/Troponin T/FITC 熒
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱 | 單純皰疹病毒(HSV)核酸試劑盒規(guī)格 |
規(guī)格 | 48T |
貨號 | LZP8116 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
百兩金素A(標準品)1,環(huán)己二甲酸
柳穿魚黃素(標準品)2-溴戊烷
瓜子金皂苷己(標準品)6-甲氧基-1-萘滿酮
通關(guān)藤苷H(標準品)1-溴代異戊烷
葫蘆素E(標準品)2-戊酮
鉤吻素子(標準品)1,丁二
鉤吻素甲(標準品)酰
原花青素B1(標準品)丁酸
杯莧甾酮(標準品)beta-氨基酸
四氫小檗(標準品)二基化膦
通關(guān)藤苷I(標準品)肌氨酸
通關(guān)藤苷G(標準品)甲
白花前胡素(標準品)2-基二
1-氨基并三唑N,N-二甲基二
紫檀芪(標準品)N,N-二甲基
紫檀芪,紫檀1-硝基烷
魚藤酮酸酯
7-表紫杉(標準品)甲基-2-戊酮
蛋白激酶B3CTn1/FITC 熒光素標記心肌肌鈣蛋白IgG100 ul
肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdinc/Troponin T/FITC 熒光素標記心肌特異性肌鈣蛋白TIgG20 ul
蛋白激酶A2CTNNAL1/FITC 熒光素標記粘附分子相關(guān)蛋白a1IgG300 ul
血管緊張素Ⅱ受體2CULLIN/Cdc53/CUL/SCFCdc4 /FITC 熒光素標記CULLINIgG100 ul
ASH1蛋白Cullin 4a/FITC 熒光素標記Cullin 4a蛋白IgG20 ul
芳香酰脫?;笜拥鞍?/font>2COMP/EPD1/FITC 熒光素標記軟骨寡聚基質(zhì)蛋白IgG100 ul
血管內(nèi)皮細胞遷移蛋白Cx26/FITC 熒光素標記整合素樣間隙連接蛋白26IgG100 ul
糖還原酶相關(guān)蛋白質(zhì)CX3CR1/FITC 熒光素標記抗CX3C趨化因子受體1100 ul
膽汁酸結(jié)合蛋白DDH2Cx32/FITC 熒光素標記間隙連接蛋白32IgG100 ul
單純皰疹病毒(HSV)核酸試劑盒規(guī)格一般受體磷酸肌醇相關(guān)支架蛋白1抗體Adynerigenin β-neritrioside中文名:別名:分子式:C42H64O17
谷氨酸受體紅藻氨酸離子5抗體Tenacissoside G中文名:通關(guān)藤苷G別名:Tenacissimoside A分子式:C42H64O14
棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶GODZ抗體Dehydroadynerigenin β-neritrioside中文名:別名:分子式:C42H62O17
G氨基丁酸A型受體α2/GABAA Rα2抗體11,12-Di-O-acetyltenacigenin B中文名:別名:分子式:C25H36O7
G氨基丁酸A型受體α4/GABAA Rα4抗體Tenacissoside I中文名:通關(guān)藤苷I別名:Tenacissimoside B分子式:C44H62O14
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。