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惡性瘧原蟲(PF)核酸試劑盒說(shuō)明書

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

惡性瘧原蟲(PF)核酸試劑盒說(shuō)明書
上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
紅花苷I(標(biāo)準(zhǔn)品)甲

西紅花苷II(標(biāo)準(zhǔn)品)基硫

細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷(標(biāo)準(zhǔn)品)2-基吡啶

仙鶴草酚B(標(biāo)準(zhǔn)品)5-溴吲哚

更新時(shí)間:2021-03-13
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注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 產(chǎn)品名稱

 惡性瘧原蟲(PF)核酸試劑盒說(shuō)明書

 規(guī)格

 48T

 貨號(hào)

 LZP8107

實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
五味子甲(標(biāo)準(zhǔn)品)基吡啶

五味子(標(biāo)準(zhǔn)品)吡啶甲

五味子甲素(標(biāo)準(zhǔn)品)Boc-L-高氨酸

五味子素(標(biāo)準(zhǔn)品)1,二

五味子酯甲(標(biāo)準(zhǔn)品)N-甲基環(huán)己

西貝母(標(biāo)準(zhǔn)品)N-

西紅花苷,α-藏花素(標(biāo)準(zhǔn)品)肼

西紅花苷I(標(biāo)準(zhǔn)品)甲

西紅花苷II(標(biāo)準(zhǔn)品)基硫

細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷(標(biāo)準(zhǔn)品)2-基吡啶

仙鶴草酚B(標(biāo)準(zhǔn)品)5-溴吲哚

血根(標(biāo)準(zhǔn)品)甲基芐

香草酸(標(biāo)準(zhǔn)品)間羥基甲

香草酸芐基*基氫氧化銨

香蒲新苷(標(biāo)準(zhǔn)品)2--5-硝基茴香

香葉木素-7-O-葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)烏洛托品

香紫蘇(標(biāo)準(zhǔn)品)*

小檗(標(biāo)準(zhǔn)品)硫酸鎳七水合物

肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合亞單位B1ocludin-5/FITC  熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白-5IgG100 ul

三酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2CLDN3/Claudin 3/FITC  熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白3IgG20 ul

甲胎蛋白CLDN4/Claudin 4/FITC  熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白4IgG500 ul

毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白CLDN5/FITC  熒光素標(biāo)記緊密連接蛋白5IgG100 ul

ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2CLEC-1/CLEC1A/FITC  熒光素標(biāo)記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員AIgG100 ul

肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白LIM蛋白3CLEC-2/CLEC1B/FITC  熒光素標(biāo)記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員BIgG20 ul

酸性鈣調(diào)蛋白3CLEC2D/OCIL/FITC  熒光素標(biāo)記CLEC2D蛋白IgG100µl

酸化CD156bCLEC5A/MDL1/FITC  熒光素標(biāo)記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族5成員AIgG100 ul

脫氫酶5CLEC13D/MMR1/CD206/FITC  熒光素標(biāo)記巨噬細(xì)胞甘露糖受體IgG300 ul
惡性瘧原蟲(PF)核酸試劑盒說(shuō)明書N-乙酰半乳糖胺糖蛋白3、β-半乳糖轉(zhuǎn)移酶1抗體Coumestrol中文名:香豆雌酚別名:分子式:C15H8O5

過(guò)氧化氫誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體Psoralidin中文名:別名:分子式:C20H16O5

核因子NFκB激活蛋白1抗體Fraxetin中文名:秦皮素別名:分子式:C10H8O5

12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框23抗體Demethylsuberosin中文名:去甲基軟木花椒素別名:分子式:C14H14O3

γ-連環(huán)素/連接蛋白γ抗體Daphretin中文名:西瑞香素別名:分子式:C19H12O7

 

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TEL:021-61210612

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