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河弧菌(VF)核酸試劑盒規(guī)格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:酸三鈉鹽KLF5 (D7S3F) Rabbit mAbN-芐基血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑Phospho- Beta-Canin (Ser552) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、β 連環(huán)素蛋白IgG100 ul拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子Phospho- Beta-Canin (Ser675) /FITC 熒光素標(biāo)記
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
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1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
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產(chǎn)品名稱 | 河弧菌(VF)核酸試劑盒規(guī)格 |
規(guī)格 | 48T |
貨號(hào) | LZP8064 |
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
Fmoc-D-甲氧基氨酸Cyclophilin A (D2Y4M) Rabbit mAb甲氧基酸
奎寧環(huán)酮鹽酸鹽Loading Control Antibody Sampler KitN-基
氟咪唑MYPT1 Antibody Sampler Kit異酸酯
氟咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)HGK (D19H10) Rabbit mAb2-羥基吡啶
伊索拉定SRF (D71A9) XP® Rabbit mAb氨基吡咯烷
ADA單鈉鹽SRF (D71A9) XP® Rabbit mAb基硫脲
N-(酰氨基)亞氨基二酸二鈉鹽SimpleChIP® Human TAP1 Promor Primers三對(duì)甲基膦
ADA;N-(2-?;?-2-亞氨基二酸DUSP4/MKP2 (D9A5) Rabbit mAb1--(三氟甲氧基)
ACES;N-(酰氨基)-2-氨基烷磺酸Anti-rabbit IgG (H+L) (DyLight™ 800 4X PEG Conjuga)對(duì)酸
(2S)-2-N-芴甲氧羰基氨基-2-甲基-6-庚酸Anti-rabbit IgG (H+L) (DyLight™ 800 4X PEG Conjuga)2-溴-5-
潑尼松龍酸鈉Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb氨基
4,4'-雙甲氧基*基Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb溴-2,6-二氟酚
N-甲酰-N-基羥;鉭試劑;BPHAHuman Lant Transforming Growth Factor β1 (hLant TGF-β1)1-溴-2-甲基丁烷
二叔丁基硅基雙(三氟磺酸)Human Lant Transforming Growth Factor β1 (hLant TGF-β1)基琥珀酸
2-基N,N,N',N'-四異基亞酰二(試劑)CD11c (3.9) Mouse mAb (APC-Cy7® Conjuga)十二烷基
酸酮酸酯一SimpleChIP® Human SUB1 Promor Primers甲基吡啶
6-鳥(niǎo)嘌呤核苷CLOCK (D45B10) Rabbit mAb肉桂
肌苷-5'-三酸三鈉鹽KLF5 (D7S3F) Rabbit mAbN-芐基
血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑Phospho- Beta-Canin (Ser552) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、β 連環(huán)素蛋白IgG100 ul
拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子Phospho- Beta-Canin (Ser675) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、β 連環(huán)素蛋白IgG100 ul
α-1抗胰糜蛋白酶Phospho- Beta-Canin (Thr41/Ser45) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、β 連環(huán)素蛋白IgG20 ul
α-1抗胰蛋白酶 Gamma-Canin/ Gamma-cats /FITC 熒光素標(biāo)記γ-連環(huán)蛋白(γ-γ鏈接素)IgG100 ul
ATP結(jié)合蛋白家族6cath-B/CB/FITC 熒光素標(biāo)記組織蛋白酶BIgG20 ul
三酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1cath-D/CD /FITC 熒光素標(biāo)記組織蛋白酶DIgG100 ul
脂聯(lián)素受體2cath-G/CG /FITC 熒光素標(biāo)記組織蛋白酶GIgG100 ul
ANGEL1蛋白cath-H/CH /FITC 熒光素標(biāo)記組織蛋白酶HIgG20 ul
ANGEL2蛋白cath-K/CK /FITC 熒光素標(biāo)記組織蛋白酶KIgG100 ul
河弧菌(VF)核酸試劑盒規(guī)格人細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA 英文名稱:Human Cyclin-D2 ELISA Kit進(jìn)口/原裝
人細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒英文名稱:Human Cyclin-D3 ELISA Kit進(jìn)口/分裝
人細(xì)菌(BV)ELISA試劑盒 英文名稱:Human bacterial vagisis,BV ELISA Kit進(jìn)口/分裝
人纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒英文名稱:Human Fibronectin,F(xiàn)N ELISA Kit 進(jìn)口/原裝
人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒 英文名稱:Human plasmin/fibrilysin,PL/Fbn ELISA Kit*
人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒英文名稱:Human plasmin-antiplasmin complex,PAP ELISA Kit進(jìn)口/原裝小鼠促性腺素釋放素受體(GHR)ELISA試劑盒 組裝/原裝
小鼠促性腺激素釋放激素(GH)ELISA試劑盒 組裝/原裝
小鼠促生長(zhǎng)激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒 組裝/原裝
小鼠促上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒 組裝/原裝