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停乳鏈球菌(StD)核酸試劑盒說明書上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:綠原酸別名:分子式:C16H18O9胃泌素抑制肽受體抗體Ethyl rutiside中文名:蕓香糖乙苷別名:分子式:C14H26O10生長因子受體結(jié)合適應(yīng)蛋白抗體18-Hydroxytritriacontan-16-one中文名:別名:分子式:C33H66O2GARNL3蛋白抗體Mannitol中文名:甘露醇別名:D-
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
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產(chǎn)品名稱 | 停乳鏈球菌(StD)核酸試劑盒說明書 |
規(guī)格 | 48T |
貨號 | LZP8047 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
磺間二甲氧嘧啶鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-cdc25C (Ser216) (63F9) Rabbit mAb2-氟-6-溴
毛地黃毒苷配基Phospho-cdc25C (Ser216) (63F9) Rabbit mAb2-氟-6-甲
柯諾辛PI4 Kinase Antibody(S)-1-BOC-2-哌甲酸甲酯
烏拉地爾(標(biāo)準(zhǔn)品)Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb溴-氟甲
夫西地酸鈉Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb2-甲基-5-溴甲酸甲酯
夫西地酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Stat3 (79D7) Rabbit mAb6-溴吲唑
3,5-二-L-酪氨酸Stat3 (79D7) Rabbit mAb對十二烷基磺酰疊氮
氟西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Ezh2 Antibody四溴雙酚 A
巴利森苷A;派立辛LAMP2 (D5C2P) Rabbit mAb1-羥基并三唑一水物
山楂酸,馬斯里酸Hamartin/TSC1 Antibody二-聯(lián)共晶
2-基并咪唑-5-磺酸,紫外線吸收劑 UV-TPhospho-Stat3 (Ser727) (D8C2Z) Rabbit mAb (Biotinylad)異基酸
毛萼素Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (APC Conjuga)雙酚 A
知母皂苷元53BP1 (P550) Antibody二二硅烷
4'-去甲鬼臼毒素Tri-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D5A7) XP® Rabbit mAb過氧化氫異
杠柳毒苷Tri-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D5A7) XP® Rabbit mAb多聚酸
1,2-二亞油酰甘油Phospho-Wee1 (Ser642) (D47G5) Rabbit mAb2-甲?;?氧代酸酯
基-N-酰-β-D-氨基半糖苷Phospho-Wee1 (Ser642) (D47G5) Rabbit mAb2-蒎
2-溴咪唑并[1,2-a]吡Phospho-YAP (Ser127) Antibody甲基酸甲酯
激活素受體1ABcl-xL/FITC 熒光素標(biāo)記抗Bcl-xL蛋白IgG100 ul
激活素受體2Ap-Bcl-xL(phospho-Ser62)/FITC 熒光素標(biāo)記抗酸化(Ser62)Bcl-xL蛋白IgG20 ul
激活素受體2BPhospho-Bcl-2 (p-Thr56) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、Bcl-2IgG100 ul
2號染色體開放閱讀框88Phospho-Bcl-2 (p-Ser70) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、Bcl-2IgG100 ul
G蛋白偶聯(lián)受體ARHGEF18Bcl-6/Bcl-5/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、原癌基因Bcl-6IgG100 ul
激活素受體1BBcl-10/CLAP/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、Bcl-10IgG20 ul
雄激素受體相關(guān)蛋白24Bcl-10(phospho Ser218)/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、Bcl-10IgG100 ul
淀粉樣肽前體蛋白(C端)Bcr/CD3D/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、T淋巴細(xì)胞受體IgG100 ul
腺苷酸環(huán)化酶2Phospho-Bcr(p-Tyr177)/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、T淋巴細(xì)胞受體IgG100 ul
停乳鏈球菌(StD)核酸試劑盒說明書葡糖淀粉酶抗體Trehalose中文名:海藻糖別名:分子式:C12H22O11
G蛋白γ11/Gγ11 抗體Chlorogenic acid中文名:綠原酸別名:分子式:C16H18O9
胃泌素抑制肽受體抗體Ethyl rutiside中文名:蕓香糖乙苷別名:分子式:C14H26O10
生長因子受體結(jié)合適應(yīng)蛋白抗體18-Hydroxytritriacontan-16-one中文名:別名:分子式:C33H66O2
GARNL3蛋白抗體Mannitol中文名:甘露醇別名:D-Mannitol; D-甘露醇分子式:C6H14O6
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。