組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
鋅原卟啉NSF (D31C7) XP® Rabbit mAb2-溴丁酸酯

美伐他汀,康百汀SNAP25 (D110) Antibody(S)-1-溴-2-甲基丁烷

美伐他汀(標(biāo)準(zhǔn)品)PKA RI-α/β Antibody1,2-戊二

6-氨基青霉烷酸PhosphoPlus® Syk (Tyr525/526) Antibody Duet溴-甲

L-天門冬酰酶,門冬酰酶Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb (Biotinylad)-甲氧基

2,2'-聯(lián)喹啉-4,4'-二甲酸二鈉(BCA)CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAb10-溴-1-癸

魏因勒卜鏈接劑,N-芴甲氧羰基-N-甲氧基-氨基酸CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAb(溴酰基)吡啶鹽

N-Fmoc-D-1,2,3,四氫異喹啉-羧酸Rab3A Antibody2-氟-5-三氟

N-芐氧羰基-L-氨酸SirT1 (D60E1) Rabbit mAb (Mouse Specific)(S)-羥基丁酸甲酯

N-芐氧羰基-L-谷氨酰Vimentin (R28) Antibody2-噻吩-5-磺酰

N-CBZ-L-氨酸Ubiquitin Antibody甲基磺酰芐溴

鹽酸美卡因PHF20 (D96F6) XP® Rabbit mAbalpha-溴代-酮

N-芐氧羰基-L-絲氨酸Phospho-Tau (Ser202) (D4H7E) Rabbit mAb2-溴-甲酸

N-芐氧羰基-L-蘇氨酸Phospho-Keratin 20 (Ser13) (D9M6O) Rabbit mAb異基甲酸

N-CBZ-beta-氨酸HMGB1 Antibody氨基-5-吡唑

CBZ-D-谷氨酸α-芐酯Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb基吡啶

N-芐氧羰基-L-酪氨酸Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb環(huán)基-氧代丁酸,95%

Z-L-酪氨酸甲酯CYR61 (E5W3H) Rabbit mAb7-溴-1H-吲唑

阿米洛利敏感鈉通道α亞基(SCNN1A)ELISA試劑盒TGF beta 3  轉(zhuǎn)移生長因子β3100 ul

阿立新A(Orexin A)ELISA試劑盒TGF Beta R1/TGFBR1  轉(zhuǎn)移生長因子β受體1100 ul

阿黑皮素原(POMC)ELISA試劑盒TGF beta R2/TGFBR2  轉(zhuǎn)移生長因子β受體220 ul

δ氨基酰酸脫水酶(ALAD)ELISA試劑盒TGF Beta R3  轉(zhuǎn)移生長因子β受體3100 ul

γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)ELISA試劑盒TGM3  轉(zhuǎn)谷氨酰酶3100 ul

γ干擾素受體(IFN-γR)ELISA試劑盒Thiosr-containing proin 1  按蚊硫酯包含蛋白-1100 ul

γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒ERdj5  ERdj5蛋白100 ul

γ分泌酶ELISA試劑盒thrombin II  凝血酶Ⅱ100 ul

γ-氨基丁酸受體亞基α1(GABRA1)ELISA試劑盒phospho-p38MAPK/MAPK14 (pThr180/pTyr182)  酸化p38MAPK100 ul
禽腦脊髓炎病毒（AEV）核酸試劑盒價格前列環(huán)素合成酶抗體Yatein中文名：別名：分子式：C22H24O7

軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗體Fragransin A2中文名：別名：分子式：C20H24O5

T淋巴細(xì)胞CD1A抗體Lancifolin C中文名：別名：分子式：C22H28O5

磷酸化周期素B1抗體Lyoniside中文名：別名：分子式：C27H36O12

胞漿型磷脂酶A2抗體Boehmenan中文名：別名：分子式：C40H40O12