?
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
NAM [=N-(9-吖啶基)馬來酰亞](>98.0%(HPLC))TCF8/ZEB1 (D80D3) Rabbit mAb十二烷基磺酸

2,萘二(>99.0%(GC))SHP-2 (D50F2) Rabbit mAb硝酸異辛酯

DBD-F [=(N,N-二甲氨基磺酰)-7-氟-2,1,并惡二唑](>98.0%(HPLC))SHP-2 (D50F2) Rabbit mAb氮雜吲唑

N-(1-芘基)馬來酰亞(>97.0%(HPLC))Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb2,1,并噻二唑

愛維莫潘Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb二基硫代酰鹽酸鹽

磺炳基十四烷基二甲甜菜Phospho-M-CSF Receptor (Tyr699) Antibody1-氧基-1-*硅氧基環(huán)烷

磺炳基十六烷基二甲甜菜GFAP (E6N9L) Mouse mAb2-吡-羧酸

聚氧月桂(Brij-35);Brij™ L23Myc-Tag (9B11) Mouse mAb (Sepharose® Bead Conjuga)(三氟甲基)

十二烷基硫酸鋰Phospho-DARPP-32 (Ser97) (D11A5) Rabbit mAb3,5-二甲

諾納德® P-40Myosin Va Antibody2-甲氧基-氨基甲酸甲酯

硫代甜菜 8Myosin IIa Antibody駢三氮唑 99.8%

硫代甜菜 10Myosin IIa Antibody1-氨基-1-環(huán)己酸

硫代甜菜 12Myosin IIb Antibody1-芐基哌

恩他卡朋;COMT抑制劑PI3 Kinase p110 δ (D1Q7R) Rabbit mAb基*氧基硅烷

曲拉通X-114Myosin IIc Antibody5-溴-2-酚

曲拉通X-405Myosin IIc Antibody野黃芩苷

異硫酸胍Phospho-M-CSF Receptor (Tyr923) Antibody硫酸氧釩

CHAPS;[(膽?；?二甲氨基]-1-磺酸IRS-1 (D23G12) Rabbit mAb1,2,3,6-四氫鄰二甲酰亞

基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA試劑盒Phospho-RasGRF1 (Ser916)  酸化Ras特異性鳥嘌呤核苷酸釋放因子120 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA試劑盒RAR-Alpha   維甲酸受體-α 10 ug

基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒RAR Beta  維甲酸受體β100 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B) ELISA試劑盒RASSF1A  Ras相關(guān)區(qū)域家族1A20 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8/Collagenase II)ELISA試劑盒Pan-ras  Pan ras100 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒RCC1  染色體濃縮調(diào)控蛋白1100 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試劑盒Phospho-RCC1 (Ser11)  酸化染色體濃縮調(diào)控蛋白1100 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒Rb/RB1 proin  視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1100 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA試劑盒Phospho-Rb (Ser608)  酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1100 ul
豬藍(lán)耳病病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格Hemk甲基轉(zhuǎn)移酶家族1號(hào)蛋白抗體Pterokaurene L3中文名：別名：Pterokaurane L3分子式：C20H30O3

Hemk甲基轉(zhuǎn)移酶家族2號(hào)蛋白抗體14-Deoxy-11,12-didehydroandrographiside中文名：別名：14-Deoxy-11,12-didehydroandrographoside分子式：C26H38O9

HEN1甲基轉(zhuǎn)移酶同源蛋白1抗體8α-Hydroxylabda-13(16),14-dien-19-yl p-hydroxycinnamate中文名：別名：分子式：C29H40O4

乙肝病毒衣殼蛋白抗體Methyl dodonate A acetate中文名：別名：分子式：C23H30O5

丙型肝炎病毒1a基因型NS5蛋白抗體6α-Hydroxynidorellol中文名：別名：分子式：C20H34O3