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纖溶酶原激活物抑制因子20 ul綿羊3-硝基酪氨酸(3-NT)ELISA試劑盒PAK4 p21激活激酶4100 ul綿羊Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒Phospho-PAK4 (Ser474)/PAK5 (Ser602)/PAK6 (Ser560) 酸化p21激活激酶
產(chǎn)品分類
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注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 魚特定基因序列PCR檢測試劑盒說明書 |
規(guī)格 | 50T |
貨號 | LZP7867 |
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
啶蟲脒(標(biāo)準(zhǔn)品)Lck (D88) XP® Rabbit mAb2-氟磺?;?/span>
多菌靈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)Lck (D88) XP® Rabbit mAb亞酸二芐酯
(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%)Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjuga)嘧啶
鹽酸水蘇(標(biāo)準(zhǔn)品)CNPase Antibody羥基酰
異水飛薊賓(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%)Transthyretin (D8T4Q) Rabbit mAb甲基二甲基硅烷
3,3’-二沒食子酸酯茶黃素(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98.0%(HPLC))RANS (R40) Antibody基-2-甲基吡啶
巴馬汀化物一水合物(分析標(biāo)準(zhǔn)品)RANS (P20) Antibody6-甲氧基-噠
BSA[=N,O-雙(*基硅基)酰](>75.0%(GC))RANS Antibody (Rodent Specific)2--6-甲氧基吡啶
TMS-BA[=N,O-雙(*基硅基)酰](25%的溶液)ASF1A (C6E10) Rabbit mAb2--甲氧基吡啶
BSTFA[=N,O-雙(*基硅基)三氟代酰](>95.0%(GC),用于氣相色譜)
Phospho-PDGF Receptor α (Tyr754) (23B2) Rabbit mAb2,6-二-羥基吡啶
TMS-咪唑(=N-*基硅基咪唑)(>98.0%(T))Phospho-PDGF Receptor α (Tyr754) (23B2) Rabbit mAb溴甲基環(huán)丁烷
N,O-雙(*硅基)酰(>75.0%(GC))Phospho-c-Jun (Thr93) Antibody3,5-二酸
N,O-雙(*基硅烷基)三氟酰(>95.0%(GC))CD14 (61D3) Mouse mAb (FITC Conjuga)基溴化鎂
N,O-雙(*基硅烷基)三氟酰,含1%*基硅烷(用于氣相色譜)Phospho-c-Jun (Ser243) Antibody鹽酸米帕明
*基硅烷(>98.0%(GC))Phospho-Tau (Ser199) Antibody咪唑-甲酸甲酯
1,1,1,3,3,六甲基二硅氮烷SimpleChIP® Mouse SLA2 Promor Primers3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-甲酸叔丁酯
N-甲基-N-*硅基酰(>92.0%(GC))SET8 (C18B7) Rabbit mAb甲酸-2,2,2-三酯
N-甲基-N-*基硅基三氟酰(>90.0%(GC))SET8 (C18B7) Rabbit mAb2,2-二甲基琥珀酸酐
綿羊5羥色/血清素/血清(5HT/ST)ELISA試劑盒PAK2 p21激活激酶2100 ul
綿羊5羥二十碳四酸(5-HE)ELISA試劑盒PAI-1 纖溶酶原激活物抑制因子20 ul
綿羊3-硝基酪氨酸(3-NT)ELISA試劑盒PAK4 p21激活激酶4100 ul
綿羊Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒Phospho-PAK4 (Ser474)/PAK5 (Ser602)/PAK6 (Ser560) 酸化p21激活激酶4、5、6100 ul
綿羊17羥孕酮(17-OHP)ELISA試劑盒Phospho-PAK4 (Ser99) 酸化p21激活激酶4100 ul
貓ELISA試劑盒PAI-2 纖溶酶原激活物抑制因子2100 ul
貓腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒phosphor-PAK1+PAK2+PAK3 (Ser141) 酸化p21激活激酶1/2/3100 ul
貓孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) 酸化p21激活激酶1/2100 ul
貓游離*狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒Phospho-PAK1 (Thr423)/PAK2 (Thr402) 酸化p21激活激酶1/2100 ul
魚特定基因序列PCR檢測試劑盒說明書細(xì)胞質(zhì)多聚腺苷酸結(jié)合蛋白3抗體4'-Hydroxy-2-O-methylanigorufone中文名:別名:分子式:C20H14O3
Complexin I/復(fù)合素1抗體2-O-Methylanigorufone中文名:別名:2-Methoxy-9-phenylphenalen-1-one分子式:C20H14O2
CD30抗體2-Methoxyphenalen-1-one中文名:別名:分子式:C14H10O2
細(xì)胞角蛋白19,17,14,42,10抗體3',4'-Dihydroxy-2-O-methylanigorufone中文名:別名:分子式:C20H14O4
細(xì)胞角蛋白10抗體Musellactone中文名:別名:分子式:C13H12O4