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雞痘病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:α-EP檢測試劑盒通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。
產(chǎn)品分類
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注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 雞痘病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格 |
規(guī)格 | 50T |
貨號 | LZP7612 |
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
阿托伐醌,阿托喹酮C23H23NO6聯(lián)甲
阿托伐醌,阿托喹酮(標(biāo)準(zhǔn)品)C20H22O4(S)-2-氨甲基-1-Cbz-吡咯烷
阿西替尼C20H20O42-咪唑甲
阿扎哌隆C21H26O6A-D-葡萄吡喃糖-水合物
鹽酸阿扎司瓊C22H22O12基-2-氟甲
氮卓斯汀C21H20O112,5-二對二甲酸
桿菌肽鋅C30H48O2N-哌甲酸酯
鹽酸貝那普利/那普利C33H52O82-溴-6-氟甲
鹽酸貝那普利/那普利(標(biāo)準(zhǔn)品)C15H16O3三叔丁氧基氫化鋁鋰
扎貝特C15H16O3對氟酯
扎貝特(標(biāo)準(zhǔn)品)C9H10O42-溴-甲
布南色林C21H24N2O22,二溴甲酸
溴夫定C47H76O18順式-六氫異吲哚鹽酸鹽
溴夫定(標(biāo)準(zhǔn)品)C30H48O氨基-基酸酯
卡巴他賽C12H14O43,5-二溴芐
米托蒽醌C7H8N4O23'--氟酮
拉莫三 C6H12O63,5-二
拉莫三 (標(biāo)準(zhǔn)品)C21H20O122-氟-5-溴吡啶-甲
淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒B-Raf B Raf100 ul
淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒c-Raf/Raf1 c Raf/Raf1500 ul
亮氨酸腦啡肽(Leu-ENK)ELISA試劑盒phospho-B-Raf (Ser365) 酸化B-Raf100 ul
鏈球菌(SK)(IgG)ELISA試劑盒phospho-B-Raf (Ser445) 酸化B-Raf20 ul
粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試劑盒phospho-B-Raf (Ser601) 酸化B-Raf100 ul
粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒BRCA1/BAP1 癌易感基因1()100 ul
酪氨酸羥化酶(TH)ELISA試劑盒Phospho-BAP1 (Ser592) 酸化癌易感基因1()100 ul
跨膜蛋白97(TMEM97/MAC30)ELISA試劑盒Phospho-BRCA1 (Ser1524) 酸化癌易感基因120 ul
克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒BRCA1/BAP1 癌易感基因1100 ul
雞痘病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格糖原蛋白1抗體2-C-Methyl-D-erythritol中文名:2-C-甲基-D-赤蘚糖醇別名:分子式:C5H12O4
葡萄糖合成酶2抗體2-(2,2-Dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl)propane-1,2-diol中文名:別名:分子式:C8H16O4
谷草轉(zhuǎn)氨酶2抗體Linderaspirone A中文名:別名:分子式:C34H32O10
葡萄糖-6磷酸脫氫酶抗體2-Hydroxytetracosaic acid ethyl ester中文名:別名:Cerebronic acid ethyl ester分子式:C26H52O3
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體Malic acid 4-Me ester中文名:別名:分子式:C5H8O5