注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
2-Ethylhexaic acidZ-L-酪氨酸甲酯  98.5%吐溫60 CP

IPC-PFFA-8 HGN-CBZ-L-絲氨酸 98%吐溫60 LR

Sodium chlorideZ-Ser(Tos)-OMe 98.5%環(huán)氧烷  99%

Potassium chlorideZ-O-叔丁基-D-絲氨酸  98.5%2,2'-聯(lián)喹啉 98%

Magnesium chloride hexahydrateZ-D-Tyt(tBu)-OH•DCHA 98.5%2--1-,(正+反) 95%

Magnesium chlorideN-芐氧羰基-O-叔丁基-L-酪氨酸二環(huán)己胺鹽  98.5%硫代乙酸乙酯 98%

Calcium chloride dihydrateZ-Trp(Boc)-OH•DCHA 98%乙酸異酯 99%

Calcium chloride anhydrousZ-L-亮氨酸DCHA   98.5%3-甲氧基丁基乙酸酯 99%

Cobalt chloride hexahydrateN-芐氧羰基-L-天門冬氨酸 4-叔丁酯  99%過硫酸銨 99.99% metals basis

Cobalt(Ⅱ) ChlorideN-芐氧羰基-N'-(4-甲氧基-2,3,6-三磺?；?-L-精氨酸環(huán)己胺過硫酸銨 AR，98.5%

Lithium chloride mohydrateCbz-3-(2-萘基)-D-氨酸 98%過硫酸銨 ACS, ≥98.0%

Lithium chlorideN-芐氧羰基-N-甲基-L-苯氨酸 98%過硫酸銨 電泳級(jí), ≥98%

Alumium chloride hexahydrate2-基-4-胺  97%過硫酸銨 分子生物學(xué)級(jí), ≥98%

Aluminum chloride anhydrous4-溴苯乙酮 98%過硫酸鈉 AR,99%

Cadmium chloride對(duì)氯苯甲 98%過硫酸鈉 99.99% metals basis

Cuprous chloride鄰氯苯甲 98%(±)-2-氨基-1-丁 97%

鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(標(biāo)準(zhǔn)品)HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAbMaltose Binding Protein/MBP  麥芽糖結(jié)合蛋白抗體

4,4'-二氨基二苯(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1254) AntibodyMALT1  粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體

鄰苯二甲酸二壬酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462) (5B12) Rabbit mAbMAL/MPV17  T淋巴細(xì)胞成熟相關(guān)蛋白抗體

鄰苯二甲酸二正戊酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462) (5B12) Rabbit mAbMAL  T淋巴細(xì)胞成熟相關(guān)蛋白抗體

鄰苯二甲酸二丁酯(標(biāo)準(zhǔn)品)CDC37 (V297) AntibodyMAL  MAL蛋白抗體

鄰苯二甲酸二丁酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(200ug/ml,基體：甲)MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAbMAGP2  纖微絲相關(guān)糖蛋白2抗體

2,4-二氨苯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%)MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAbMAGEL2  黑色素瘤抗原樣基因2抗體

3,3'-二甲氧基聯(lián)苯胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Presenilin 1 AntibodyMAGEG1/HCA4/NDNL2  黑色素瘤相關(guān)抗原G1抗體（肝癌相關(guān)蛋白4）

2，4-二氯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/ml,基體：甲)PSD95 (7E3) Mouse mAbMAGEF1  黑色素瘤抗原F蛋白家族1抗體

2,6-二氯苯酚(標(biāo)準(zhǔn)品)β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)MAGEE1/MAGEC2  黑色素瘤相關(guān)抗原C2抗體
白色念珠菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格裸鼠蛋白磷酸酶(PP)ELISA試劑盒英文名稱：Nude Mouse Protein Phosphatase,PP ELISA Kit *

裸鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)ELISA試劑盒英文名稱：Nude mouse cyclooxygenase-2,COX-2 ELISA Kit*

裸鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒 英文名稱：Nude mouse Alpha-fetoprotein,AFP ELISA Kit 進(jìn)口/分裝

裸鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16) ELISA試劑盒英文名稱：Nude Mouse Clara cell protein,CC16 ELISA Kit 進(jìn)口/原裝

駱駝β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒英文名稱：Camel Beta-Endorphin,β-EP ELISA Kit進(jìn)口/原裝

駱駝內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒英文名稱：Camel Endothelin 1,ET-1 ELISA Kit *小鼠神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)導(dǎo)向因子(Slit2)ELISA試劑盒      組裝/原裝         
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。