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蒙得維的沙門氏菌PCR檢測試劑盒價(jià)格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:LP Ab-IgA檢測試劑盒自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
產(chǎn)品分類
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注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 蒙得維的沙門氏菌PCR檢測試劑盒價(jià)格 |
英文名稱 | Salmonella montevideoPCR |
貨號(hào) | LZP7261 |
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
Alisol E 23-acetate楊酸甲酯 CP,98%薯蕷皂素 90%
Alisol F楊酸甲酯 藥用級(jí),99%薯蕷皂素 95%
Alisol G楊酸甲酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)氘代酮 (D,99.8%) + TMS (0.03%)
Alisol K 23-acetate楊酸 AR,99.5%氘代酮 (D,99.9%)
Alisol O楊酸 Ph. Eur., BP, USP, 99.5-100.5%氘代乙 (D,99.96%)
alpha-Amyrin acetate楊酸鈉 AR,99.5%乙酸-D4 (D, 99.5%)
alpha-Amyrin楊酸鈉 CP,99.5%氘代乙酸 (D,99.93%)
alpha-Amyrin palmitate楊酰胺 99%氘代苯-d6 D,99.6%
alpha-Boswellic acid楊酰胺 USP級(jí)氘代苯-d6 D,99.6% (0.03% v/v TMS)
alpha-Hederin楊酰胺 matrix substance for MALDI-MS氘代苯-d6 D,99.96% (0.03% v/v TMS)
alpha-Ocerol苯甲 重蒸餾, ≥99.5%氘代苯-d6 D,99.96%
Alphitolic acidα,α,α-三氯甲苯 99%氘代氯-d (D, 99.8%) +1% V/V TMS
Alstonic acid AN,N-二甲基乙酰胺 or HPLC, ≥99.8% (GC) 氘代氯-d (D, 99.8%) +0.03% V/V TMS
Alstonic acid B二溶液 AR,40 wt. % in H2O氘代氯-d D, 99.8%
Beta-Amyrel acetate二 Standard for GC二氯-d2 D,99.96%
AnemosapogeninN,N-二甲酰胺 GR,99.9%二甲基亞砜-d6 D.99.9%
四乙基氯化銨(>98%,BR)HCN2 (D1C6I) Rabbit mAbPhospho-PTEN(Ser380/Thr382/Thr383) 磷酸化腫瘤抑制基因PTEN抗體
吐溫60Rpb1 NTD (D8L4Y) Rabbit mAbPhospho-PTEN(Ser380) 磷酸化腫瘤抑制基因PTEN抗體
甲苯噻;賽拉CGRP (D5R8F) Rabbit mAbPhospho-PSD95 (Tyr236/Tyr240) 磷酸化突觸后密度蛋白95抗體
酵母多糖 A(>98% (HPLC),BC)CGRP (D5R8F) Rabbit mAbPhospho-PSD93 (Tyr340) 磷酸化突觸后密度蛋白93抗體
3,5-二甲酸(>98%,BR)EphB4 (D1C7N) Rabbit mAbphospho-Proteasome 20S beta 7(Ser214) 磷酸化蛋白酶體PSMβ7抗體
40%乙溶液Sox2 (D1C7J) XP® Rabbit mAbPhospho-Progesterone Receptor(Ser190) 磷酸化孕激素受體抗體
硫酸鈣(>99%,BR)Sox2 (D1C7J) XP® Rabbit mAbphospho-PRL(Ser163) 磷酸化泌乳素抗體
硝酸鈷六(>98.0-102.0%,BR)PROX1 (D2J6J) Rabbit mAbphospho-PRKD3(Ser41) 磷酸化蛋白激酶C nu型抗體
二環(huán)己基碳二亞胺(>99%,BR)Phospho-CDCP1 (Tyr743) (D2G2J) Rabbit mAbphospho-PRKD1(Tyr463) 磷酸化蛋白激酶C mu型抗體
鹽酸鑭六(>99%,BR)VPRBP (D5K5V) Rabbit mAbphospho-PRKD1(Ser742) 磷酸化蛋白激酶C mu型抗體
蒙得維的沙門氏菌PCR檢測試劑盒價(jià)格小鼠FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT10克
小鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT25克
小鼠IgGELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT,避光25克
小鼠IgMELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
小鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1公斤
小鼠N端前腦素(NT-proBNP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
小鼠N-乙?;?絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1公斤