Product Center
皮里陶病毒PCR檢測試劑盒說明書上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:LDL檢測試劑盒應(yīng)取10μl樣品進行稀釋,個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
RELATED ARTICLES組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
?
產(chǎn)品名稱 | 皮里陶病毒PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Pirital virus(PIRV)RTPCR |
貨號 | LZP7143 |
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
Cetyl pyridinium HC1鎘 99.999%,granular2.6-二氯苯酸 95%
Hexadecylpyridinium bromide碲化鎘 99.999%,5N2.6-二氟-4-甲氧基苯酸 95%
Hexadecylpyridinium chloride碲化鎘 99.9999%,6N2,5-二甲基-2,4-己二烯 97%,含60-100ppm BHT穩(wěn)定劑
STAB銦 99.999%2,3-二酸 97%
OTAC銦 SP2,5-二酸 97%
TTAB鉛 flakes,SP3,5-二酸 97%
TTAC鉛 99.99%,powder2,5-二甲氧基苯酸 98%
DTAC鉛 99.999%,粒狀,1-3mm2,3-二氟苯酸 98%
DTAB質(zhì)鉛標(biāo)樣 1.0mg/l,分析標(biāo)準(zhǔn)品2,4-二氟苯酸 98%
SLS高純硫 99.99% metals basis2,5-二氟苯酸 97%
Sodium dodecanesulfonate高純硫 99.999% metals basis2,5-二氯苯酸 98%
Sodium dodecylbenzenesulfonate高純硫 分析標(biāo)準(zhǔn)品3,4-二甲氧基苯酸 97%
EDDAB硒粉 99.9% metals basis,200目2,3-二氯吡啶-4-酸 95%
Tween 20硒粉 ≥99.99% metals basis,200目2,4-二酸 97%
Tween 40硒粉 ≥99.999% metals basis,-100mesh,powder3-乙氧羰基苯酸 97%
Tween 60硒 ≥99.9999% metals basis,Powder4-乙氧羰基苯酸 97%
鹽酸舍曲林(標(biāo)準(zhǔn)品)FoxP3 (D6O8R) Rabbit mAbRabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈
7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN-38)FoxP3 (D6O8R) Rabbit mAbRabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈
戊酸鈉THOC4/ALY (D3R4R) Rabbit mAbRabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈
戊酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Smad 1/5/9 Antibody Sampler KitRabbit anti-mouse Kappa light chain 兔抗小鼠k鏈
司帕沙星Plasmigen AntibodyRabbit anti-mouse Kappa Chain whole serum 兔抗小鼠k-鏈抗血清
司帕沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)VEGF Receptor 2 (D5B1) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)Rabbit Anti-mouse IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗小鼠IgM
氟喹酮c-Rel (D5G1A) Rabbit mAb (ChIP Formulated)Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗小鼠IgM
氟喹酮(標(biāo)準(zhǔn)品)CABIN1 (D2B9F) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠IgM
磺胺醋酰鈉 SA-NAIL-17RA (D1Y4C) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgM/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗小鼠IgM
磺胺醋酰鈉 SA-NA(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-CAD (Ser1859) AntibodyRabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗小鼠IgM
皮里陶病毒PCR檢測試劑盒說明書人凝血酶受體(TR)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT250克
人凝血酶血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物(T-TM)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:250毫克
人凝血酶原(PT)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃200毫升
人凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA *shēng huà shì jì 容量:100克
人凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃100KU
人凝血因子Ⅲ(FⅢ)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃5克
人凝血因子Ⅶ(FⅦ)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃1克
人凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克