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海水派琴蟲PCR檢測試劑盒說明書上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:β-OHB檢測試劑盒所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱 | 海水派琴蟲PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Perkinsus marinusPCR |
貨號 | LZP7135 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
Anthrone軟脂酸 分析標準品,>99%(GC)聚乙烯 6-98 Mw ~47,000
Thiomichler's ketone軟脂酸 97%聚乙烯 8-88 Mw ~67,000
Michler's ketone軟脂酸 99%四氧化三鈷 CP,Co 72.0~73.5%
Phenylfluorone正戊 GR,99%四氧化三鈷 99.9% metals basis
PMBP2-苯乙 Standard for GC,>99.5%(GC)鈷酸鋰 99.8% metals basis
PMP2-苯乙 CP,98%乙酰氯 AR,98.5%
Phenidone2-苯乙 AR,99%乙酰溴 97%
α-Naphtholbenzein2-苯乙 ≥99%, FCC, FG三乙基芐基氯化銨 98%
Azocarmine B正 GCS,≥99.8% (GC) 異丁酰氯 98%
Azocarmine G正 AR,99.0% 酰溴 95%
Thionin正 CP,98.5% 酰氯 98%
Tartrazine正 for HPLC, ≥99.9%四丁基溴化銨 CP,98.0%
Allura Red AC正 ACS, ≥99.5%四乙基溴化銨 98%
Sunset Yellow FCF正 分析標準品蒽醌 CP
Lissamine rhodamine B正 農(nóng)殘級2-甲基萘 97%
Phesafranine酸 AR,≥99.5% (GC) N,N,N',N'-四甲基-1,3-二胺 97%
富馬酸酮替芬IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific)Rabbit Anti-rat IgM/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗大鼠IgM
富馬酸酮替芬(標準品)Keratin 17 (D12E5) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-rat IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗大鼠IgM
酮咯酸Keratin 17 (D12E5) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-rat IgM/PE PE標記的兔抗大鼠IgM
來氟米特PTEN Blocking PeptideRabbit Anti-rat IgM/HRP 辣根過氧化物酶標記的兔抗大鼠IgM
來氟米特(標準品)FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)Rabbit Anti-rat IgM/Gold 膠體金標記的兔抗大鼠IgM
左氧氟沙星LC3B (D11) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)Rabbit Anti-rat IgM/FITC FITC標記的兔抗大鼠IgM
左氧氟沙星(標準品)SignalSilence® BRCA1 siRNA IRabbit Anti-rat IgM/Cy7 Cy7標記的兔抗大鼠IgM
氯諾昔康Voristat (SAHA)Rabbit Anti-rat IgM/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗大鼠IgM
氯諾昔康(標準品)Mo-Methyl-Histone H3 (Lys79) (D5X1S) Rabbit mAbRabbit Anti-rat IgM/Cy5 Cy5標記的兔抗大鼠IgM
洛沙坦/氯沙坦SignalSilence® γ-Catenin siRNA I (Mouse Specific)Rabbit Anti-rat IgM/Cy3 Cy3標記的兔抗大鼠IgM
海水派琴蟲PCR檢測試劑盒說明書人美洲商陸素(PWM)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1公斤
人免疫反應(yīng)性生長激素(irGH)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃350ku
人免疫核糖核酸(Irna)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃1克
人免疫球蛋白AFc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1克
人免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃100毫克
人免疫球蛋白EFc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500克
人免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:50毫克
人免疫球蛋白GFc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:10毫克
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。