Product Center
馬蛔蟲PCR檢測試劑盒廠家上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:OH 2D3/DVD/DHVD 3檢測試劑盒預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)生物素(biotin)標
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
RELATED ARTICLES?
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 馬蛔蟲PCR檢測試劑盒廠家 |
英文名稱 | Parascaris equorumPCR |
貨號 | LZP7110 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
Gum acacia powder乙酰乙酸乙酯 >99.0%(GC)2,7-二溴芴 98%
Canada balsam乙酰乙酸甲酯 99%1,4-二氯酞 98%
Ethyl carbamate3-基吡啶 99%4,4'-二聯(lián)苯 98%
D-Xylose鄰苯二甲 98%9-芴甲 99%
D-Xylulose山梨酸 >99.0%(T)雙酚芴 98%
Xylitol2-基吡啶 98%(R)-3-(3-氟苯基)-5-羥甲基惡唑烷-2-酮 98%
Cholesterol3-甲基吡啶 99%(S)-N-[[3-(3-氟苯基)-2-氧代-5-惡唑烷基]甲基]乙酰胺 98%
Cholesteryl acetate4-基吡啶 98%高良姜素 98%
Cholesteryl chloride山梨酸 AR,99%2-羥基-6-甲基吡 98%
β-Sitosterol山梨酸 CP,99%4--1-甲基-1H-吡唑 97%
Glycogen山梨酸 分析標準品4--1H-咪唑 97%
Glycogen from oyster山梨酸標準溶液 1.00mg/mL,基體:純1-(2-乙基)-2-甲基-5-硝基-1H-咪唑 98%
Glycogen from rabbit liver山梨酸 99.8%1-甲基-D-色氨酸 96%
Glycogen from bovine liverL-氨酸甲酯鹽酸鹽 98%2-磺酰胺 98%
CurdlanL-精氨酸乙酯 98%(S)-2-硝基-6,7-二氫-5H-咪唑并[2,1-b][1,3]惡-6- 98%
α-D-Lactose mohydrateL-氨酸芐酯對甲苯磺酸鹽 98%吡唑-3-甲酰胺 97%
去氧孕烯PhosphoPlus® Cleaved PARP (Asp214) Antibody DuetRNF93/ZNF178 環(huán)指蛋白93抗體
地索奈德 AMPKβ1 AntibodyRNF87 環(huán)指蛋白87
甲磺酸加貝酯Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)RNF86 環(huán)指蛋白86
甲磺酸加貝酯(標準品)Paxillin (D9G12) Rabbit mAbRNF8 環(huán)指蛋白8抗體
地塞米松,氟美松MASTL (D3J4Y) Rabbit mAbRNF70 環(huán)指蛋白70抗體
地塞米松,氟美松(標準品)PathScan®Phospho-c-Abl (Tyr412) Sandwich ELISA KitRNF7/CKBBP1 環(huán)指蛋白7抗體
鹽酸地爾硫卓SPHK1 (D1H1L) Rabbit mAbRNF6 環(huán)指蛋白6抗體
鹽酸地爾硫卓(標準品)Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)RNF56/CBLB 環(huán)指蛋白56
地美司鈉β-Amyloid (1-39 Specific) (D5Y9L) Rabbit mAbRNF44 環(huán)指蛋白44抗體
甲磺酸多拉司瓊MCM2 (1E7) Mouse mAbRNF43 環(huán)指蛋白43抗體
馬蛔蟲PCR檢測試劑盒廠家人抗類風濕關(guān)節(jié)炎核抗原(RANA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃,避光5克
人抗類固醇生成細胞抗體(SCA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT,避光5克
人抗利尿激素/血管加壓素/精氨酸加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃5克
人抗鏈球菌溶血素O/抗O(ASO)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:10毫升
人抗淋巴細胞毒抗體(ALA/LCA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT,避光25克
人抗淋巴細胞球蛋白(ALG)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃100u
人抗磷壁酸抗體(TA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
人抗磷脂抗體(Apl/APA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8°C100克