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綿羊星狀病毒型PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:FDFT1檢測(cè)試劑盒僅配制一份對(duì)照溶液容易造成因配制對(duì)照溶液過(guò)程出現(xiàn)偏差
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION?
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 綿羊星狀病毒型PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格 |
英文名稱 | Ovine Astrovirus 1(OAstV)1RTPCR |
貨號(hào) | LZP7097 |
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
24-Epicastasterone液體石蠟 分子生物學(xué)級(jí)2-甲基丁酸乙酯 98%
Brassilide液體石蠟 包埋級(jí)乙酸丁香酚酯 98%
6-BA正十二烷基苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% (GC)反-3-己烯酸乙酯 98%
6-KT6-正基-2-硫代尿嘧啶 分析標(biāo)準(zhǔn)品呋喃酮 98%
6-CP全氟辛酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析呋喃酮 ≥98%, FCC, FG
6-MP2,4,6-三磺酸 5 % (w/v) 溶液呋喃酮 natural, ≥98%, FG
Purine2-基硫 96%檸檬 97%
Guanine姥鮫烷 98%檸檬 97%, FCC, Kosher
Guanine HC14-(1-吡咯烷)苯甲 97%香葉 98%
8-Azaguanine聚苯乙烯,1000 分析標(biāo)準(zhǔn)品香葉 97%
Xanthine聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-馬來(lái)酸)鈉鹽 摩爾比率3:1香葉 Standard for GC, ≥99.0% (GC)
Hypoxanthine聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-馬來(lái)酸)鈉鹽 摩爾比率1:1乙酸香葉酯 96%
4-Ami-PGA藍(lán)VF Indicator乙酸香葉酯 90%,天然, FCC, Kosher
MTX乙酸苯酯 99%香葉基酮 97%
2-IP撲草凈 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%甲酸香葉酯 85%
N6-Benzoyladenine撲草凈標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6% 甲酸香葉酯 85%,FCC, Kosher
雌酚酮/雌酮WBP2 AntibodySCUBE1 新型血小板相關(guān)血管內(nèi)皮分泌蛋白SCUBE1抗體
雌酚酮/雌酮(標(biāo)準(zhǔn)品)USP8 (D18F6) Rabbit mAbSCRO/DCUN1D1 鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)蛋白抗體
鹽酸克林霉素FGF Receptor 2 (D4H9) Rabbit mAbSCP3 聯(lián)會(huì)復(fù)合體蛋白3抗體
鹽酸克林霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Cell Fractionation Antibody Sampler KitSCP2/NLTP 固攜帶蛋白2抗體
鹽酸維拉帕米HA-Tag (C29F4) Rabbit mAb (Magnetic Bead Conjugate)SCNN1D/δENaC 上皮鈉離子通道蛋白D抗體
鹽酸維拉帕米(標(biāo)準(zhǔn)品)GST (26H1) Mouse mAb (Magnetic Bead Conjugate)SCNN1B/βENaC 上皮鈉通道β抗體
霉酚酸; 麥考酚酸;MPAAkt (pan) (C67E7) Rabbit mAb (Magnetic Bead Conjugate)SCN9A/NAV1.7 電壓開(kāi)啟的鈉離子通道SCN9A抗體
霉酚酸; 麥考酚酸(標(biāo)準(zhǔn)品)PAX5 (D19F8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)SCN8A/Nav1.6 鈉通道蛋白8α抗體
阿莫西林/羥氨芐青霉素p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)SCN3B 電壓門控鈉通道SCN3B蛋白抗體
阿莫西林(標(biāo)準(zhǔn)品)Acetyl-Histone H3 (Lys9) (C5B11) Rabbit mAb (Pacific Blue™ Conjugate)SCN2A SCN2A抗體
綿羊星狀病毒型PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格人結(jié)核菌桿抗體IgG(TB-AbIgG)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100毫克
人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃,避光250毫克
人解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:5克
人解整合素樣金屬蛋白酶10(ADAM10)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT500毫升
人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1克
人解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT5克
人金葡菌腸毒素(SE)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT500毫克
人金屬蛋白(MT)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT10克