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羊口瘡病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:GCK檢測試劑盒對已開封的標(biāo)準(zhǔn)品(對照品)管理方面的問題應(yīng)做嚴(yán)格的規(guī)定,不應(yīng)同未開封的標(biāo)準(zhǔn)品(對照品)放在一起繼續(xù)使用
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱 | 羊口瘡病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格 |
英文名稱 | Orf Virus(ORFV)PCR |
貨號 | LZP7084 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
Streptokinase recombinantD-果糖-6-磷酸二鈉,二 98%印刷標(biāo)簽,用于100G(ML)包裝,尺寸:94mm*55mm
Phosphotransacetylase from Bacillus stearothermophilus鈣熒光探針FIuo,3-AM 70%印刷標(biāo)簽,用于500G(ML)及以上包裝,尺寸: 105mm*86mm
Casein熒蒽 分析標(biāo)準(zhǔn)品印刷標(biāo)簽,超大號, 95mm*210mm
Casein Na saltD-半乳糖 分析標(biāo)準(zhǔn)品印刷標(biāo)簽,大號,尺寸: 62mm*150mm
Heparin sodium salt羥基乙酰胺 98%印刷標(biāo)簽,中號, 42mm*98mm
Heparin lithium三油酸甘油酯 99%印刷標(biāo)簽,小號, 25mm*100mm
SPA戊二酰氯 97%印刷標(biāo)簽,超小號,尺寸: 18mm*100mm
Collagen甘草次酸(α型) 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%21mm空白小標(biāo)簽 21mm
BSAN-(γ-L-谷氨酰)-1-萘胺 BR阿拉丁免檢小標(biāo)簽 125mm*32mm
OVAL-甘油酸鈣鹽,一 97%阿拉丁免檢大標(biāo)簽 160mm*60mm
HASDL-甘油 90%有此處開封 標(biāo)簽 140*20mm
Avidin(chiken egg white)甘氨脫氧膽酸 97%內(nèi)有貨單此處開封 標(biāo)簽 140*20mm
Streptavidin葡萄糖 standard for GC, ≥99.5% (GC)易碎物品 標(biāo)簽 150*120mm
Methyl albumin葡萄糖 分析標(biāo)準(zhǔn)品L-乳酸鈣 USP級
Hb胰高血糖素氫氯化物(人) ≥97.0% (HPLC)(-)-乳酸乙酯 98%
Hb羥基萘酚藍(lán) IND,94%(HPLC)(-)-乳酸乙酯 99%
硫酸鏈霉素IFN- Gamma(Interferon Gamma)Ag-mouse、rat 干擾素-γ多肽抗原(大、小鼠)SKAR DNA聚合酶δ相互作用蛋白3抗體
硫酸鏈霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)IFN- Gamma(Interferon Gamma)Human 干擾素-γ多肽抗原(人)SKALP/Elafin 彈性蛋白酶抑制劑抗體
硫酸雙氫鏈霉素IFN- Beta (Interferon Beta)Anti-mouse,rat 干擾素-β抗原SKA3 紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白3抗體
雙氯芬酸鈉IFN- Beta (Interferon Beta) human 干擾素-β抗原SKA2 紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白2抗體
雙氯芬酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)PSCA 前列腺干細(xì)胞抗原SKA1 紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白1抗體
加巴噴丁ADH/AVP peptide 抗利尿激素/血管升壓素抗原(和肽素)SISP1/GI24 應(yīng)激誘導(dǎo)分泌蛋白1抗體
加巴噴丁(標(biāo)準(zhǔn)品)PRRSV M protein 豬藍(lán)耳病病毒M蛋白SIRT7 沉默調(diào)節(jié)樣蛋白SirT7抗體
多潘立酮Newcastle disease virus/HRP 雞新城疫疫苗(雞瘟4型混合病毒)偶聯(lián)辣根過氧化物酶SIRT6 沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白6抗體
多潘立酮(標(biāo)準(zhǔn)品)sIgA 大鼠分泌型IgA(抗原)SIRT5 沉默調(diào)節(jié)蛋白5抗體
帕潘立酮Melamine/KLH 三聚氰胺與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)物SIRT4/SIR 2 like protein 4 沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白4抗體
羊口瘡病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格人環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃25毫克
人環(huán)加氧酶2(COX-2)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500毫升
人環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT支
人環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
人環(huán)磷酰(CTX)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
人黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
人混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域(MLKL)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:5克
人活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃1克
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。