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腸致病性大腸桿菌PCR檢測試劑盒廠家上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:SmIg檢測試劑盒 8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA試劑盒腎素(Renin)ELISA試劑盒 7-O-甲基白楊素;7-O-Methyl積雪草苷;Asiaticoside
產(chǎn)品分類
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注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 腸致病性大腸桿菌PCR檢測試劑盒廠家 |
英文名稱 | Enteropathogenic E.coli(EPEC)PCR |
貨號 | LZP6706 |
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
木蝴蝶素480-11-5價格Anti-DNMT3B Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞粘附分子
青蒿酸80286-58-4 ?實驗方法Anti-DNMT3L Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué)
柯諾辛因堿630-94-4實驗步驟Anti-DOK1 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞骨架
瑞香素486-35-1價格Anti-DOK2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 新陳代謝
甜菜素 107-43-7實驗步驟Anti-DNPH1 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 生長因子和激素 糖蛋白
香蒲新苷104472-68-6價格Anti-DOK1 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué)
血根堿5578-73-4? *Anti-DOK3 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 激酶和磷酸酶
羥基芍藥苷39011-91-1*Anti-DOK2 Antibody蛋白分子量 predicted molecular weight: 18kDa
林澤蘭內(nèi)酯C 實驗方法Anti-DOK6 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 細(xì)胞分化
丹酚酸D142998-47-8價格Anti-DOK4 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué)
長春花堿865-21-4*Anti-DOK7 Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞膜蛋白
去甲斑蝥酸鈉*Anti-DP-1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物
L-天冬氨酸鎂價格Anti-DPF2 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞骨架 表觀遺傳學(xué)
L-正纈氨酸價格Anti-DPF2 Antibody研究領(lǐng)域 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞骨架 細(xì)胞外基質(zhì)
L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽保存Anti-DP-2 Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 干細(xì)胞 表觀遺傳學(xué)
3,5-二-2-羧酸 2,6-二硝基-3-甲氧基-4-叔丁基 4-乙酰
1-(3-丙基)-4-甲基 二麝香 3-乙酰
4-乙基苯鹽酸鹽 2-甲氧基-4-酚 2-乙?;?3-(2,5-二苯基)-丙烯酸
2--5-胺 芐基異丁香酚 (R)-2-乙?;?3-(2,6-二-苯基)-丙酸
1-Tetradecanethiol 正十四烷基硫醇 2079-95-0
Carrageenan 卡拉膠 11114-20-8
Bromo thymol blue paper 溴麝香草酚藍(lán)試紙
Litmuspaperneutral 中性石蕊試紙
大鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒 ,英文名: LPL ELISA Kit
人胰島細(xì)胞抗體(ICA)ELISA檢測試劑盒Humanisletcellaibody,ICAELISAKit 96T/48T
大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)免疫試劑盒 Rat Cystatin C,Cys-C ELISA Kit
CLIAKitfoIEG1(HumaGF-beta-inducibleearlyresponsegene-1)ELISAKit人TGF-β誘導(dǎo)早期基因1規(guī)格:48T/96T
全組織衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒10次
ELISAKitAOAb人抗卵巢抗體規(guī)格:48T/96T
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小鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒英文名稱:Mouse Cytochrome-C,Cyt-C ELISA Kit進(jìn)口/分裝
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小鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒英文名稱:Mouse Cyclin-D3 ELISA Kit進(jìn)口/分裝
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