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腦胞內(nèi)原蟲屬通用·PCR檢測(cè)試劑盒說明書上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:TSP-1檢測(cè)試劑盒 PAFAH2/Lp-PLA2/PLA2G7(platelet-activating factor acetylhydrolase 2) 脂蛋白磷脂酶A2抗原Lgr5/GPR49 腸上皮干細(xì)胞蛋白(多肽)
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
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產(chǎn)品名稱 | 腦胞內(nèi)原蟲屬通用·PCR檢測(cè)試劑盒說明書 |
英文名稱 | Encephalitozoon spp.·PCR |
貨號(hào) | LZP6683 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
L-脯氨醇使用說明書Anti-CLEC11A Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 生長(zhǎng)因子和激素 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物
BOC-D-天冬酰胺實(shí)驗(yàn)步驟Anti-CLDN8 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞凋亡
BOC-L-絲氨酸使用說明書Anti-CLEC3B Antibody研究領(lǐng)域 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
L-叔亮氨酸保存Anti-CLIC3 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞周期蛋白 激酶和磷酸酶
聚苯乙烯樹脂使用說明書Anti-CLEC4M Antibody研究領(lǐng)域 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 通道蛋白
SDS-PAGE蛋白質(zhì)中分子量保存Anti-CLEC4A Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué)
丁基瓊脂糖凝膠4B使用說明書Anti-CLIP2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 干細(xì)胞 細(xì)胞表面分子
纖維素透析袋實(shí)驗(yàn)步驟Anti-CLIC6 Antibody蛋白分子量 predicted molecular weight: 40kDa
三道定時(shí)鐘價(jià)格Anti-CLIP3 Antibody蛋白分子量 predicted molecular weight: 80kDa
硅膠HF254價(jià)格Anti-CLK2 Antibody蛋白分子量 predicted molecular weight: 43kDa
甲砜霉素保存Anti-CLIP4 Antibody蛋白分子量 predicted molecular weight: 41kDa
鏈霉蛋白酶價(jià)格Anti-CLK1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
腺苷脫氨酶使用說明書Anti-CLK4 Antibody蛋白分子量 predicted molecular weight: 67kDa
溶壁微球菌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟Anti-CLN5 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡
變旋酶使用說明書Anti-CLN5 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 干細(xì)胞 細(xì)胞類型標(biāo)志物 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物
2-甲氧基-4-(*基)苯基硼酸 (R)-3-叔丁氧羰基基吡咯烷 1,8-二溴芘
*磺酸鐵(III) (S)-(-)-1,2,3,4-四氫-1- 1,6-二溴芘
4-甲硫基乙酯 R-四氫 9,9-二甲基芴
2,3-二-4-乙氧基苯硼酸 L-(-)-二對(duì)甲氧基苯甲酰 9,9-二甲基-2-溴芴
2-Bromoanisole 2-溴苯甲醚 578-57-4
TERT-AMYL M 甲基叔戊基醚 994-05-8
1,3-Dimethoxybenzene 間苯二甲醚 151-10-0
15-Crown-5 15-冠醚-5 33100-27-5
大鼠整合素α2(ITGA2)ELISA試劑盒 ,英文名: ITGA2 ELISA Kit
人抗線粒體抗體(AMA)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanAi-mitochondriaaoaibodies,AMAELISAKit 96T/48T
大鼠白介素9(IL-9)免疫試劑盒 Rat Ierleukin 9,IL-9 ELISA KIT
CLIAKitfogtp(Huma-cellspecificGTPase)ELISAKit人T細(xì)胞特異性鳥苷三磷酸酶規(guī)格:48T/96T
全組織酸性磷酸酶活性染色試劑盒10次
ELISAKitALG人抗淋巴細(xì)胞球蛋白規(guī)格:48T/96T
腦胞內(nèi)原蟲屬通用·PCR檢測(cè)試劑盒說明書人重去甲腎上腺素(NE-B)ELISA試劑盒英文名稱:Human radrenaline Bitartas,NE-B ELISA Kit*
兔子神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒英文名稱:rabbit Neuron-specific elase,NSE ELISA Kit進(jìn)口/分裝
兔子神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒英文名稱:rabbit neurotrophin 3,NT-3 ELISA Kit *
兔子神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒英文名稱:rabbit neurotrophin 4,NT-4 ELISA Kit *
兔子腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒英文名稱:Rabbit soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA Kit*
兔子生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒英文名稱:Rabbit Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA Kit 進(jìn)口/分裝
兔子視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒英文名稱:Rabbit Retil binding protein 4,RBP-4 ELISA Kit *
檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。