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疏螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒說明書

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疏螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒說明書
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更新時(shí)間:2021-03-14
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注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 產(chǎn)品名稱

 疏螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒說明書

 英文名稱

 Borrelia afzelii PCR

 貨號(hào)

 LZP6475

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
小鼠凝血因子XIII B(F13B)elisa試劑盒Anti-IL4 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞膜受體 G蛋白偶聯(lián)受體 表觀遺傳學(xué) G蛋白信號(hào)  

小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)elisa試劑盒Anti-IL4 Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 糖尿病  

小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eS-3)elisa試劑盒Anti-IL4R Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞類型標(biāo)志物  

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小鼠輪狀病毒(RV)抗原(Ag)elisa試劑盒Anti-IL4R Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白  

小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)elisa試劑盒Anti-IL4R Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 細(xì)胞類型標(biāo)志物  

小鼠膠原吡啶交聯(lián)(PYD)elisa試劑盒Anti-IL5RA Antibody研究領(lǐng)域  心血管 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 干細(xì)胞 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 鋅指蛋白 表觀遺傳學(xué)  

小鼠活化素A(ACV-A)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 激酶和磷酸酶  

小鼠骨特性堿性磷酸酶(BALP)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 糖尿病  

小鼠長(zhǎng)停滯特異性基因產(chǎn)物6(gas-6)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學(xué) 新陳代謝  

小鼠白血病抑制因子受體(LIFR)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞表面分子  

小鼠白介素9(IL-9)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)  

小鼠胺氧化酶(含黃素)A(MAOA)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)  

小鼠γ干擾素受體(IFN-γR)elisa試劑盒Anti-IL6 Antibody產(chǎn)品類型  一抗  內(nèi)參抗體   

小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)elisa試劑盒Anti-IL6R Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)  

1,2-二錄乙烷¤1,2-DichloroethaneAR500ml

M5885-100gL-Proline L-脯安酸147-85-3100g42

81325-5GPolygalacturonic acid 多聚半乳糖酸鈉25990-10-75g

Hematoxylin and Eosin Staining Kit

次甲基藍(lán) (亞甲基藍(lán))25g

十二醇DodecalGCS2ml

ER1652TauI250 units2

G6251-25Gβ-Glycerophosphate diwo7ium β-甘油磷酸鈉819-83-025g

肌酸酐5g

肖鐿5g

大鼠氧化酶(XOD)ELISA試劑盒 ,英文名: XOD ELISA Kit

Rabbit oponin I (Tn- I) ELISA Kit 兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒

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CLIAKitforMouselymphocytefactorELISAKit小鼠淋巴細(xì)胞因子規(guī)格:48T/96T

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ELISAKit2,3-DPG人2,3-二磷酸甘油酸規(guī)格:48T/96T
疏螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒說明書人肝癌細(xì)胞,Bel-7405細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

人肝癌細(xì)胞,Hep G2細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

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檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

 

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