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藍(lán)舌病病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:GMP-140檢測(cè)試劑盒Vimentin 波形蛋白(抗原)VSIG4 (V-set and immunoglobulin domain-containing protein 4) VSIG4 T淋巴細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)蛋白之一(抗原)
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 藍(lán)舌病病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書 |
英文名稱 | Bluetongue Virus(BTV)RTPCR |
貨號(hào) | LZP6463 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
山羊谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)elisa試劑盒Anti-HTRA1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
山羊超氧化物歧化酶2線粒體(SOD2)elisa試劑盒Anti-HTT Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 細(xì)胞膜受體
人堿性亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子ATF樣蛋白(BATF)elisa試劑盒Anti-HYAL1 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué)
人甲狀腺素(T4)elisa試劑盒Anti-HYAL1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 干細(xì)胞 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
人骨堿性磷酸酶(BALP)elisa試劑盒Anti-HYAL3 Antibody研究領(lǐng)域 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號(hào)
人谷胱甘肽還原酶(GR)elisa試劑盒Anti-HYAL1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶 細(xì)胞膜受體
人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子激活物(HGFA)elisa試劑盒Anti-HYAL2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶
人二?;视停?/font>DAG/DG)elisa試劑盒Anti-Iba1 Antibody研究領(lǐng)域 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
人蛋白磷酸酶1調(diào)控/抑制因子亞基1A(PPP1R1A)elisa試劑盒Anti-Iba1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
人單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)elisa試劑盒Anti-IBSP Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9(FGF9)elisa試劑盒Anti-HYI Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤
人巢蛋白1(NID1)elisa試劑盒Anti-IBSP Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 神經(jīng)生物學(xué)
人表皮細(xì)胞活化肽因子(CAPF)elisa試劑盒Anti-ICAM1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 激酶和磷酸酶
人板層素相關(guān)多肽2亞型α(TMPO)elisa試劑盒Anti-ICAM1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡
人白介素29(IL-29)elisa試劑盒Anti-ICAM1 Antibody(原貨號(hào)PB0053)研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué)
蛋白胨 F403Peptone F403BR250g
CL6941-1mglysostaphin(1200U/mg)溶葡球菌酶9011-93-21mg
0691-500GD-Sorbitol D-山梨醇50-70-4500g
DL-DTT10ml(0.5M)
甲安蝶呤5G
己酸乙酯etxyl caproateGCS2ml
SM1143O`GeneRuler 100bp DNA Ladder, ready-to-use204
M0482-100MLβ-Mercaptoethal β-48-44-4100ml
秋仙堿(素)250mg
二甲本青FF1g
大鼠牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1(DMP1)ELISA試劑盒 ,英文名: DMP1 ELISA Kit
人蛋白(nephrin)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanNephrinELISAKit 96T/48T
大鼠TAR DNA結(jié)合蛋白43(TARDBP)免疫試劑盒 Rat TAR DNA-binding protein 43,TARDBP ELISA kit
CLIAKitforSP-R(HumansubstancePreceptor)ELISAKit人P物質(zhì)受體規(guī)格:48T/96T
溶血卵磷脂LPC(lysophosphatidylcholine)高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20次
ELISAKitMIP-1β/CCL4人巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β規(guī)格:48T/96T
藍(lán)舌病病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞,MHCC-97H細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
人細(xì)胞,C33A細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
人細(xì)胞,CASKI細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
人細(xì)胞,HELA-S3細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
人骨肉瘤細(xì)胞,HOS細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
人骨肉瘤細(xì)胞,MG-63細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。