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當(dāng)前位置:首頁(yè)  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  PCR檢測(cè)試劑盒  -  50T鳥(niǎo)類(lèi)髓細(xì)胞瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

鳥(niǎo)類(lèi)髓細(xì)胞瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

鳥(niǎo)類(lèi)髓細(xì)胞瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
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pANCA檢測(cè)試劑盒
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更新時(shí)間:2021-03-14
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注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 產(chǎn)品名稱(chēng)

 鳥(niǎo)類(lèi)髓細(xì)胞瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

 英文名稱(chēng)

 Avian Myelocytoma Virus(AMV)RTPCR

 貨號(hào)

 LZP6399

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
P0蛋白抗體(IgM)elisa試劑盒Anti-CST3 Antibody研究領(lǐng)域  心血管 細(xì)胞生物  

NOD樣受體(NLR)elisa試劑盒Anti-CSTA Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 表觀遺傳學(xué)  

G1/S特異性細(xì)胞周期蛋白E1(CCNE1)elisa試劑盒Anti-CSTA Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 染色質(zhì)和核信號(hào) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) Alzheimer's  

FAM172A蛋白(FAM172A)elisa試劑盒Anti-CSTB Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號(hào)  

COLL2-1NO2 elisa試劑盒Anti-CSTA Antibody研究領(lǐng)域  心血管 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號(hào)  

CC趨化因子受體1(CCR1)elisa試劑盒Anti-CSTB Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 糖尿病  

B細(xì)胞生長(zhǎng)因子(BCGF)elisa試劑盒Anti-CSTB(Cystatin B) Antibody研究領(lǐng)域  心血管 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 糖尿病 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白  

Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1)elisa試劑盒Anti-CSTB(Cystatin B) Antibody研究領(lǐng)域  心血管 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 G蛋白偶聯(lián)受體  

牛血清淀粉樣蛋白A(SAA)elisa試劑盒Anti-CSTB Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 表觀遺傳學(xué)  

牛鋅金屬硫蛋白(Zn-MT)elisa試劑盒Anti-CTAG1A Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 激酶和磷酸酶  

牛心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)elisa試劑盒Anti-CTBP1 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 發(fā)育生物學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 細(xì)胞周期蛋白  

牛維生素A(VA)elisa試劑盒Anti-CTBP1 Antibody(原貨號(hào)PB0400)研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 染色質(zhì)和核信號(hào) 細(xì)胞周期蛋白 表觀遺傳學(xué)  

綿羊肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)elisa試劑盒Anti-CTBP2 Antibody(原貨號(hào)PB0401)研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細(xì)胞 細(xì)胞周期蛋白  

大鼠可溶性CD80(sCD80)elisa試劑盒Anti-CTCF Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 細(xì)胞周期蛋白 細(xì)胞分化  

大鼠抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)elisa試劑盒Anti-CTBP2 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 細(xì)胞周期蛋白 細(xì)胞分化  

Bacillusanthracisphage

M-ENDO broth 膜過(guò)濾ENDO肉湯 1.10750.0500 MERCK默克 incubation media M-ENDO broth 膜過(guò)濾ENDO肉湯 1.10750.0500 MERCK默克

胰化大豆瓊脂 250g 普通的或營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng),還醫(yī)藥工業(yè)潔凈室無(wú)菌程度的監(jiān)測(cè)。

兔骨髓間質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化*培養(yǎng)基Rabbitbonemarrowmesenchymalstemcellsintochondrocytesinduceddifferentiationofcompletemedium

SIM動(dòng)力培養(yǎng)基 250g 動(dòng)力試驗(yàn)

CLED培養(yǎng)基添加劑  CLED Medium Supplement  1毫升×5支  加入100mlC.L.E.D培養(yǎng)基中

PEA瓊脂  PEA Agar  250克  從含革蘭氏陰性菌的標(biāo)本中分離培養(yǎng)革蘭氏陽(yáng)性菌

NTM培養(yǎng)基  NTM Medium  250克  淋球菌的分離培養(yǎng)

伊格爾培養(yǎng)基  SMEM  10升  細(xì)胞培養(yǎng)用
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中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞,CTLA4 IG-24細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

豬鼻甲黏膜成纖維細(xì)胞,PT-K75細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

豬肺泡巨噬細(xì)胞,3D4/21細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

豬腎,PK-1細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶

豬腎,PK-13細(xì)胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

 

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