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蜂房小甲蟲PCR檢測試劑盒廠家上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:sIL-6R檢測試劑盒大葉茜草素丹參酚酸A丹參酮Ⅰ
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
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產(chǎn)品名稱 | 蜂房小甲蟲PCR檢測試劑盒廠家 |
英文名稱 | Aethina tumidaPCR |
貨號 | LZP6350 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人白細(xì)胞抗原DR(HLA-DR)elisa試劑盒Anti-ATG7 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 結(jié)合蛋白 細(xì)胞類型標(biāo)志物
人白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)elisa試劑盒Anti-ATOH1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 激酶和磷酸酶
人白介素6受體(IL-6R)elisa試劑盒Anti-ATP11C Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
人白介素37(IL-37)elisa試劑盒Anti-ATP1A2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 脂蛋白 新陳代謝
人白介素24(IL-24)elisa試劑盒Anti-ATM Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶
人β1腎上腺素能受體(β1AR)抗體elisa試劑盒Anti-ATP2A1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
人β β胡蘿卜素9' 10'加氧酶(BCO2)elisa試劑盒Anti-ATP2A3 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
人α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(α-GST)elisa試劑盒Anti-ATP2A1 Antibody研究領(lǐng)域 心血管 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
人α-輔肌動(dòng)蛋白4(ACTN-4)elisa試劑盒Anti-ATP2A2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物 表觀遺傳學(xué)
人α1抗胰蛋白酶(α1-AT)elisa試劑盒Anti-ATP4B Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
人Z-DNA結(jié)合蛋白1(ZBP1)elisa試劑盒Anti-ATP2A2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細(xì)胞 細(xì)胞周期蛋白 激酶和磷酸酶 細(xì)胞分化
人v-rel禽網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞過多癥病毒癌基因同源物B(RelB)elisa試劑盒Anti-ATP7A Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細(xì)胞 細(xì)胞周期蛋白 細(xì)胞分化 細(xì)胞類型標(biāo)志物
人UV切除修復(fù)蛋白RAD23 同源物A(RAD23A)elisa試劑盒Anti-ATP5MC1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
人PL12抗體/抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)elisa試劑盒Anti-ATRX Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 生長因子和激素
人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)elisa試劑盒Anti-ATP7B Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 生長因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
EB增菌液凍干配套試劑SR0090支添加于225ml(0260成EB增菌液。
Mueller-Hinton 瓊脂 (CM0337) Oxoid incubation media Mueller-Hinton 瓊脂 (CM0337) Oxoid
繩狀青霉 溶菌試驗(yàn) 支/瓶
西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂250g腸道菌的檸檬酸鹽利用試驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))
AgarmediumK(Xylose,lysine,deoxycholateagar)
MRS瓊脂 MRSA 250克 食品中乳酸菌的培養(yǎng)
改良MRS瓊脂培養(yǎng)基 MRS Lactotacillus Agar Modified 250克 乳酸菌的測定,雙歧桿菌和嗜酸乳酸菌的計(jì)數(shù)
UBA培養(yǎng)基 UBA Medium 250克 啤酒中厭氧菌檢測
NBB瓊脂 NBB Agar 250克 啤酒中厭氧菌檢測
蜂房小甲蟲PCR檢測試劑盒廠家Diethyl fumarate,98%通用試劑 25G
Diethyl phosphite,94%通用試劑 100ML
Triethyl phosphite,98%通用試劑 100ML
Ethyl gallate,96.0%通用試劑 25G
Titanium(IV) isopropoxide,97.0%通用試劑 100ML
Propylene carbonate,99%通用試劑 100G
Isobutyl chloroformate,98.0%通用試劑 25G
Furfuryl acetate,≥98%通用試劑 25G
Allyl chloroacetate,98%通用試劑 5ML
Isobutyl isobutyrate,≥98%通用試劑 25ML
Ethyl cyaacetate,≥98%通用試劑 100G
Ethyl p-toluenesulfonate,98%通用試劑 25G
Diallyl phthalate,97%通用試劑 100ML
Methyl Carbazate,97%通用試劑 25G
Benzyl carbazate,97%通用試劑 5G
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。